艾美捷worthington優(yōu)化技術：細胞定量

為了有效地評估每個程序，量化每個解離步驟的結果非常重要。建議使用細胞計數室（血細胞計數器）進行產量定量，并使用臺盼藍進行活力定量。概述了使用血細胞計數器進行細胞產量定量；但是，此程序的新手可以參考更詳細的討論（參見 Freshney，動物細胞培養(yǎng)，第 227 頁）。

艾美捷worthington細胞定量所需用品：

改進的 Neubauer 血細胞計數器

細胞兼容培養(yǎng)基或 BSS

巴斯德移液器或微量移液器

顯微鏡 (10X)

柜臺

艾美捷worthington細胞定量程序：

1.用 70% 異丙醇仔細清潔計數室表面和血細胞計的蓋玻片，并使其風干。小心不要刮傷這些表面。

2.用試劑水潤濕蓋玻片的側面，并將蓋玻片對準計數室。

3.使用巴斯德移液器或微量移液器取充分混合的 20-50 µl 等分的解離細胞懸液，僅將細胞吸入尖端。通過將移液器的尖端放在腔室邊緣并讓腔室通過毛細作用完全充滿，立即將細胞懸浮液轉移到計數室。不要過度或不足填充腔室。

4.對血細胞計數器另側的第二個腔室使用另個等分樣品重復此過程。

5.將血細胞計數器放在顯微鏡臺上，并使用計數插圖10X 物鏡，注于計數室網格線。根據需要調整對比度以清楚地看到網格和分散的單元格。

6.通過緩慢移動滑塊來調整字段區(qū)域，以獲得由三條線包圍的中心網格（見下圖）。計算此 1 mm ²區(qū)域中存在的單元格總數，包括位于頂部和左側邊界上的單元格，不包括位于右側和底部邊界上的單元格。

7.為了準確計數至少 100-500 個細胞。根據產量和密度，可以計算更多或更少的面積。

8.重復第二個室的計數。如果不存在第二個腔室，則應清潔載玻片并重復該過程。

計算：

C = Ñ x 10 ⁴

其中 C = 每毫升細胞數

Ñ = 計數細胞數的平均值

10 ⁴ = 1 mm ₂的體積轉換系數

總產量 = C x V

其中 V = 細胞總體積 (ml)

例子：

計數1 = 183 個細胞/mm ²

計數2 = 175 個細胞/mm ²

細胞體積 = 55 ml

C = 178.5 x 10 ⁴ = 1,785,000 個細胞/ml

總產量 = C x V = 1785,000 x 55 = 98,175,000 個細胞

注意：為獲得佳效果，細胞密度應至少為每毫升10 ⁵ 個細胞。常見錯誤是由于在取樣細胞懸浮液混合不當和/或在裝載血細胞計數器計數室之允許細胞在移液管中沉淀。避免對多個細胞聚集體進行計數；聚集體的存在表明解離不完全，這可能需要進步優(yōu)化分離參數。單細胞懸液提供佳結果。

Worthington注于高質量純化酶，蛋白質，核酸和試劑盒。其核心酶產品包括：膠原蛋白酶，脫氧核糖核酸酶I，彈性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。艾美捷科技是Worthington的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質的產品與服務。

來源:https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml