在這項(xiàng)研究中，作者產(chǎn)生了種針對(duì) SAP-1（克隆 123）的單克隆抗體 (mAb)，然后使用二次免疫熒光和 艾美捷 Nanoprobes Nanogold 標(biāo)記來(lái)研究這種蛋白質(zhì)在小鼠胃腸道內(nèi)的分布。

分辨率優(yōu)勢(shì)：

艾美捷 Nanoprobes Nanogold-Fab＇ 與常規(guī) 5 nm 膠體金-IgG 探針的尺寸比較，顯示了整體探針尺寸和金與目標(biāo)的距離。由于其位于鉸鏈區(qū)，Nanogold 在結(jié)合時(shí)更靠近目標(biāo)，但不會(huì)阻礙或干擾結(jié)合。此外，其較小的尺寸允許更密集的標(biāo)記，并有助于滲透到組織中并獲得受阻抗原。

用這種 mAb 進(jìn)行的免疫印跡分析揭示了大約 250-kDa SAP-1 蛋白在腸道中的顯著表達(dá)，以及在睪丸中的低水平表達(dá)。十二指腸或空腸中的SAP-1含量明顯高于胃或結(jié)腸。對(duì) SAP-1 的 mAb 的免疫組織熒光顯示 SAP-1 定位于腸上皮細(xì)胞的頂端表面，類(lèi)似于埃茲蛋白或堿性磷酸酶，已知這兩種酶都定位于腸上皮的微絨毛。在鬼筆環(huán)肽顯示的 F-肌動(dòng)蛋白顯著染色上方立即檢測(cè)到 SAP-1 免疫反應(yīng)性，這可能對(duì)應(yīng)于腸上皮細(xì)胞刷狀緣處的末端網(wǎng)。

對(duì)于免疫電子顯微鏡研究，通過(guò)腹膜內(nèi) (ip) 注射 25 mg/kg 重量的戊巴比妥鈉對(duì)小鼠進(jìn)行麻醉，然后在 0.1 M 二甲胂酸鈉緩沖液 (pH 7.4) 中經(jīng)心灌注 2% PFA 和 2.5% 戊二醛。取出組織并在相同的固定劑中在 4°C 下浸泡 1 小時(shí)，然后在 4°C 下與相同緩沖液中的1% OsO 4起孵育 1 小時(shí)。然后將它們脫水并嵌入 Epon。對(duì)于免疫 EM，組織樣品在室溫下通過(guò)在含有 4% 多聚甲醛 (PFA) 和 1% 戊二醛的磷酸鹽緩沖鹽水 (PBS) 中浸泡 2 小時(shí)進(jìn)行固定。使用 mAb 對(duì)小鼠 SAP-1 和Nanogold 標(biāo)記的 Fab＇ 山羊抗大鼠 IgG制備和處理 10 µm 厚的冷凍切片進(jìn)行免疫染色. 使用HQ Silver Enhancement 套件增強(qiáng)信號(hào)。銀增強(qiáng)完成后，切片再次用1% OsO 4和0.1% 亞鐵qing化鉀固定，后包埋在Epon中。然后制備超薄切片（90 nm），用乙酸雙氧鈾和檸檬酸鉛染色，并用 JEM 1010 電子顯微鏡（JEOL）檢查。

標(biāo)記模式分析證實(shí)SAP-1蛋白定位于胃腸上皮細(xì)胞刷狀緣微絨毛；小鼠 SAP-1 mRNA 主要局限于胃腸道。其他實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，SAP-1 在小鼠腸道中的表達(dá)在胚胎發(fā)育期間小，但在出生后顯著增加，與腸上皮細(xì)胞的分化致。SAP-1缺陷小鼠的腸上皮形態(tài)沒(méi)有明顯變化。然而，SAP-1 消融抑制了腺瘤性結(jié)腸息肉基因雜合突變小鼠的腫瘤發(fā)生，導(dǎo)致大腺瘤（> 2 mm）減少。這些結(jié)果表明 SAP-1 是種微絨毛特異性 RPTP，可調(diào)節(jié)腸道腫瘤發(fā)生。

艾美捷 Nanoprobes Nanogold-Fab＇ 參考文獻(xiàn)：

Sadakata, H.; Okazawa, H.; Sato, T.; Supriatna, Y.; Ohnishi, H.; Kusakari, S.; Murata, Y.; Ito, T.; Nishiyama, U.; Minegishi, T.; Harada, A., ａnd Matozaki, T.: SAP-1 is a microvillus-specific protein tyrosine phosphatase that modulates intestinal tumorigenesis. Genes Cells, 14, 295-308 (2009).

Abstract (courtesy of Wiley Interscience).

Nanoprobes注于免疫金標(biāo)記和免疫測(cè)定試驗(yàn)域，為廣大科研機(jī)構(gòu)提供用于檢測(cè)生物分子的靈敏的試劑和技術(shù)。艾美捷科技是Nanoprobes的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。

來(lái)源：https://www.amyjet.com/brand/Nanoprobes.shtml