1916 年，Rous 和 Jones 使用“Merck、Brubler 和 Kahlbaum 的胰蛋白酶粉末”消化活細胞在其中生長的血漿凝塊，以獲得用于傳代培養(yǎng)的細胞懸液。1934 年，Vogelaar 和 Erlichman 是下個研究人員，他們利用粗胰蛋白酶制劑中的消化酶來液化人成纖維細胞在傳代培養(yǎng)之生長的凝固血漿。Scherer、Syverton 和 Gey 于 1953 年引入了類似于天使用的胰蛋白酶技術，以收獲當時新培養(yǎng)的 HeLa 細胞株，用于繼代培養(yǎng)和生化分析。這些工作人員測試了重結晶胰蛋白酶和 NF 1:250 胰蛋白酶用于細胞收獲，發(fā)現(xiàn)純化的胰蛋白酶更有效，對細胞的毒性更小。盡管如此，NF 1：

相對粗制的胰腺制劑如 NF 1:250 胰蛋白酶天仍然用于細胞收獲，盡管它們表現(xiàn)出相當大的批次間變異性并含有外來物質(zhì)和其他酶活性。粗胰蛋白酶中的雜質(zhì)會對細胞造成不必要的損害并降低克隆效率。使用更高純度的結晶胰蛋白酶可以消除許多這些困難。

NF 1:250 材料中存在的任何污染物似乎都不是細胞收獲活性所必需的，因為純化的胰蛋白酶對單層解離非常有效，而且粗制 NF 1:250 胰蛋白酶加大豆胰蛋白酶抑制劑無效。

McKeehan 和 Ham 報告說，在低溫（即 4°C）下用結晶胰蛋白酶收獲時，在低血清培養(yǎng)基中單細胞的活力和增殖潛力顯著提高。

艾美捷Worthington細胞釋放程序：

為了將單層培養(yǎng)中的細胞從個培養(yǎng)容器轉移或傳遞到另個培養(yǎng)容器，有必要將細胞從單層釋放到懸浮液中，以便可以通過移液和稀釋輕松處理它們。

從單層釋放細胞幾乎總是使用純化的胰蛋白酶通過稱為胰蛋白酶化的過程來完成。通常的胰蛋白酶消化過程在下面的插圖中進行了詳細說明。

艾美捷Worthington胰蛋白酶消化程序：

1.從細胞中去除培養(yǎng)基。

2.添加無菌胰蛋白酶溶液（在 BSS 平衡鹽溶液中，通常不含鈣的 Hanks。

3.讓胰蛋白酶溶液在室溫或 37°C（或 4°C 更長時間）下作用于單層幾分鐘。

4.輕輕去除胰蛋白酶溶液，以免干擾細胞。

5.添加 BSS 或培養(yǎng)基（通常含有血清或胰蛋白酶抑制劑以滅活殘留的胰蛋白酶）并攪拌容器以破壞單層細胞并懸浮細胞。

些研究人員發(fā)現(xiàn)，使用結晶胰蛋白酶的程序可以提高細胞釋放后的活力。活力通常通過測量克隆效率來確定，即單個細胞附著在培養(yǎng)容器壁上并分裂產(chǎn)生染色后肉眼可見的細胞集落的能力。

注：Worthington 的組織解離酶可互換用于所引用的大多數(shù)制劑。

Worthington核心酶：包括：膠原蛋白酶，脫氧核糖核酸酶I，彈性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。

Worthington主要研究覆蓋生物技術和生命科學研究，診斷，生物制藥和生物加工應用的高質(zhì)量純化酶，蛋白質(zhì)，核酸和試劑盒。艾美捷科技是Worthington的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務。