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Worthington過氧化物酶活性的6種測定方法
點擊次數(shù):0發(fā)布時間:2022/7/26 16:54:16
更新日期:2022/7/26 16:54:16
所 在 地:中國大陸
產品型號:
優(yōu)質供應
詳細內容
單位定義:個 Worthington 單位在 25°C、pH 7.0 下使用氨基安替比林和苯酚每分鐘分解 1µmole H 2 O 2 。
技術說明:RZ (Reinheitzahl) 是吸光度比率,A 403 /A 275,已被用作純度的指示。然而,Shannon et al., JBC, 241 , 266 (1966) 報道了同工酶的這個比率在 2.50 到 4.19 之間變化。這點,連同緩沖液和 pH 值的影響,似乎使這個比率作為純度標準的準確性受到質疑。
許多不同的方法用于過氧化物酶活性的測定。下面列出了由艾美捷Worthington確定的些近似轉換。
• 1 個 Worthington 單位 = 4.6 個 Worthington 以使用的鄰聯(lián)苯胺單位
• 1 個 Worthington 單位 = 0.62 個 ABTS 單位(每分鐘氧化的微摩爾染料,pH 6.0,25°C,1.7 mM 染料)
• 1 個 Worthington 單位 = 2 個 ABST 單位( µmole 每分鐘氧化的染料,pH 5.0,25°C,8.7 mM 染料)
• 1 Worthington 單位 = 0.5 愈創(chuàng)木酚單位(每分鐘氧化愈創(chuàng)木酚的 µmole,pH 7.0,25°C)
• 1 Worthington 單位 = 0.5 連苯三酚到 purpogallin單位(mg 產品每 20 ,pH 6.0,20°C)
• 1 Worthington 單位 = 5 連苯三酚到 purpogallin 單位(在 pH 6.0,30°C 下每分鐘微摩爾產品)
艾美捷Worthington過氧化物酶的測定:
方法:傳統(tǒng)上,過氧化物酶活性以連苯三酚的氧化速率為單位表示,這是 Willstalter 和 Stoll 在 1917 年引入的種方法,近的研究表明這種方法有些不足。(Maehly 和 Chance 1954。)在過氧化物酶測定系統(tǒng)中已經使用了多種氫供體,包括可能致癌的化合物,例如鄰聯(lián)茴香胺。采用 4-氨基安替比林作為氫供體的改進測定法已被采用(Trinder 1966)。反應速率通過測量過氧化氫分解引起的 510 nm 處吸光度的增加來確定。在指定條件下,在 25°C 和 pH 7.0 條件下,個單位會導致每分鐘分解 1 微摩爾過氧化氫。
試劑:
0.2 M 磷酸鉀緩沖液 pH 7.0
0.0017 M 過氧化氫。用試劑水將 1 ml 30% 過氧化氫(Merck Superoxol 或等效物)稀釋至 100 ml。用 0.2 M 磷酸鉀緩沖液 pH 7.0 將 1 ml 該溶液進步稀釋至 50 ml。每天準備新鮮。
0.0025 M 4-氨基安替比林和 0.17 M 苯酚:通過將 810 mg 苯酚溶解在 40 ml 試劑水中進行制備。加入 25 mg 4-氨基安替比林并用試劑水稀釋至終體積為 50 ml。
酶:
以 1 mg/ml 溶解在試劑水中。臨用,進步稀釋以獲得 0.02-0.04 ΔA/min 的速率。
程序:
將分光光度計調整到 510 nm 和 25°C。
將移液器移入每個比色皿,如下所示:
苯酚/氨基安替比林溶液 1.4 毫升
0.0017 M過氧化氫 1.5 毫升
在分光光度計中于 25°C 孵育 3-4 分鐘以達到溫度平衡并確定空白率(如果有)。加入 0.1 ml 稀釋酶并記錄 A 510的增加4-5 分鐘。從曲線的線性部分計算ΔA 510 /分鐘。
計算:
注:雖然用苯酚安替比林法得到的反應速率比以的方法低 4.5-4.7 倍,但過氧化物酶制劑是相同的。
RZ (Reinheitzahl) 是吸光度比,A 403 /A 275 (RZ) 已被用作純度的指示。然而,香農等人。(1966) 報告說,同工酶的這個比率從 2.50 變化到 4.19。這點,連同緩沖液和 pH 值的影響,似乎使這個比率作為純度標準的準確性受到質疑。
Worthington主要研究覆蓋生物技術和生命科學研究,診斷,生物制藥和生物加工應用的高質量純化酶,蛋白質,核酸和試劑盒。艾美捷科技是Worthington的中國代理商,為科研工作者提供優(yōu)質的產品與服務。