該試劑盒是與 Ronal MacGregor 博士合作制定的。該方法基于 Toraason 等人描述的方法。Toxicol, 56 , 107 (1988)，其中將切碎的組織與純化的胰蛋白酶在 2-8°C 下孵育過夜。正如 Toraason 所指出的，與在溫胰蛋白酶或膠原酶中連續(xù)孵育所涉及的時間相比，此步驟減少了收獲細胞所需的手動操作時間。使用純化的膠原酶而不是粗膠原酶來大化產(chǎn)量和活力。

艾美捷 Worthington新生兒心肌細胞分離系統(tǒng)內(nèi)容：

該包裝包含足夠的材料，可用于五個單獨的組織解離，每個包含多達 12 個心臟。對于較大或較小的組織樣本，在每個步驟中準備相應體積的試劑，并按照協(xié)議中所述的相同比例將它們組合起來。

• 小瓶 1 : 1 瓶，500 毫升：無菌不含鈣和鎂的漢克平衡鹽溶液 (CMF HBSS)，pH 7.4。除了用作解離的介質(zhì)外，該溶液還用于重構(gòu)小瓶 #2 和 #3 的內(nèi)容物。

• 小瓶 2：5 小瓶，每瓶 1000 µg：Worthington 胰蛋白酶（代碼：TRLS），3X 結(jié)晶，用 1mM HCl 透析，通過 0.22 微米孔徑的膜過濾，并凍干。使用，用 2ml CMF HBSS（1 號小瓶）復溶并輕輕旋轉(zhuǎn)以溶解內(nèi)容物。儲存在 2-8°C。

• 小瓶 3： 5 小瓶，每瓶 2000 µg：Worthington 大豆胰蛋白酶抑制劑（代碼：SIC），種 0.22 微米孔徑的膜過濾凍干粉末。使用，用 1ml CMF HBSS（1 號小瓶）復溶并輕輕旋轉(zhuǎn)以溶解內(nèi)容物。儲存在 2-8°C。

• 小瓶 4：5 小瓶，每個 1500 單位：Worthington 純化膠原酶（代碼：CLSPA），種 0.22 微米孔徑膜過濾的凍干粉末，經(jīng)過色譜純化。它每毫克含有少于 50 個酪蛋白酶單位，由兩種可分離但非常相似的膠原酶組成。使用，用 5ml Leibovitz L-15 培養(yǎng)基（如下所述制備）復溶并輕輕旋轉(zhuǎn)以溶解內(nèi)容物。儲存在 2-8°C。

• 裝有 Leibovitz L-15 培養(yǎng)基粉末的袋子：1 x 1L，通過切開信封頂部并將內(nèi)容物倒入裝有 800 毫升細胞培養(yǎng)水的燒杯中來重構(gòu)袋子的全部內(nèi)容物。用額外的 100 毫升沖洗袋子 2-3 次。使總體積達到 1 升并通過 0.22 微米孔徑的過濾器過濾。

該試劑盒還包括 5 個細胞過濾器 (Falcon)，這是張將酚紅顏色與 pH 值相關聯(lián)的卡片，用于檢查平衡鹽溶液和培養(yǎng)基。

艾美捷 Worthington新生兒心肌細胞分離系統(tǒng)參考文獻：

1.Engelmann, G., McTiernan, C., Gerrity, R., Samarel, A.： 技術 2 , 279, 1990

3.Fratalli, V. 和 Steiner, R.： 大豆抑制劑。、從商品粗制大豆胰蛋白酶抑制劑中分離出三種抑制劑及其些性質(zhì) ， 生物化學 7 , 521, 1968

4.Freshney, R. Ian： 《動物細胞培養(yǎng)基本技術手冊》，第 4 版。,, Wiley-Liss, Inc., 紐約, , 2000

5.Gross, W.、Schopf-Ebner, E. 和 Bucher, O.： 分離心肌細胞均質(zhì)培養(yǎng)物的制備技術 ， Exp Cell Res 53 , 1, 1968

Worthington主要研究覆蓋生物技術和生命科學研究，診斷，生物制藥和生物加工應用的高質(zhì)量純化酶，蛋白質(zhì)，核酸和試劑盒。艾美捷科技是Worthington的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務。

來源：https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml

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