接下來(lái)小編給大家說(shuō)的這個(gè)艾美捷sGAG檢測(cè)試劑盒——門用于檢測(cè)樣本中的硫酸氨基聚糖，它采用常規(guī)生化方法，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線和比色，可定量分析總硫酸化多糖（氨基聚糖和蛋白聚糖）的含量，亦可測(cè)定O端和N端硫酸氨基多糖的比值。主要起作用的是Blyscan染料，它可以特異性的與氨基聚糖和蛋白聚糖上的硫酸多糖組分結(jié)合，該方法不適于檢測(cè)已經(jīng)降解的硫酸化雙糖片段。

艾美捷sGAG檢測(cè)試劑盒的特點(diǎn)：

可檢測(cè)廣泛的蛋白多糖，可檢測(cè)的氨基多糖包括硫酸軟骨素、硫酸角質(zhì)素、硫酸皮膚素、硫酸肝素，不適合檢測(cè)包含海藻酸的樣品，因?yàn)樗鼈兒刑侨┧帷Ｔ撛噭┖幸膊荒軐?duì)透明質(zhì)酸定量，但透明質(zhì)酸并不會(huì)對(duì)硫酸化氨基多糖的檢測(cè)產(chǎn)生干擾。細(xì)胞培養(yǎng)基中20%的胎牛血清也不會(huì)干擾實(shí)驗(yàn)。該方法檢測(cè)靈敏度為5ug，所需時(shí)間為1小時(shí)。

艾美捷sGAG檢測(cè)試劑盒檢測(cè)樣本：

可來(lái)自軟骨組織、動(dòng)脈組織、肺組織、皮膚組織、腫瘤組織、細(xì)胞核組織提取物、細(xì)胞培養(yǎng)液、羊水和尿液

Blyscan檢測(cè)流程圖：

艾美捷sGAG檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟 ：

1. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

2. 待測(cè)樣品的處理：

取50ul待測(cè)樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。如果反應(yīng)物在656nm初的吸收峰大于1.5，則對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，待測(cè)樣樣品濃度落入標(biāo)準(zhǔn)曲線中段時(shí)，準(zhǔn)確度較高。

3. 硫酸氨基聚糖—染料復(fù)合物的獲得

加1.0ml的Blyscan染料溶液到待測(cè)樣本中，充分混勻，待不溶物出現(xiàn)，離心，棄上清，則獲得紫色的硫酸氨基聚糖—染料復(fù)合物

4. 硫酸氨基聚糖—染料復(fù)合物中染料的釋放

加入1.0ml的染料釋放劑，充分混勻。溶解5min以上，使染料充分釋放

5. 測(cè)定

用分光光度計(jì)于波長(zhǎng)656nm處測(cè)定，或使用colorimeter紅色濾光片測(cè)定

sGAG檢測(cè)試劑盒已發(fā)表文章，超500篇，僅摘錄展示部分：

1、Ahn, G., Min, K., Kim, C., Lee, J., Kang, D., reports, J. W.-S., & 2017 Precise stacking of decellularized extracellular matrix based 3D cell-laden constructs by a 3D cell printing system equipped with heating modules. Nature.com.

2、Makris, E., & Responte, D. (2014). Developing functional musculoskeletal tissues through hypoxia ａnd lysyl oxidase- induced collagen cross-linking. PNAS 111, E4832 E4841.

3、Prewitz,M.C., Seib,F.P., von Bonin,M., Friedrichs,J., Sti+ el,A., Niehage,C., M++ller,K., Anastassiadis,K., Waskow,C. ａnd Hoflack,B. (2013) Tightly anchored tissue-mimetic matrices as instructive stem cell microenvironments. Nature Methods 10, 788 794

4、Song,J.J., Guyette,J.P., Gilpin,S.E., Gonzalez,G., Vacanti,J.P. ａnd Ott,H.C. (2013) Regeneration ａnd experimental orthoic transplantation of a bioengineered kidney. Nature medicine, 19, 646-651.