逆轉(zhuǎn)錄

5＇ → 3＇ 核酸外切酶活性

逆轉(zhuǎn)錄酶是在逆轉(zhuǎn)錄病毒病毒基因組中編碼的酶。該酶負(fù)責(zé)病毒 RNA 的轉(zhuǎn)錄以產(chǎn)生可插入宿主基因組的 dsDNA。

逆轉(zhuǎn)錄酶是多功能酶。這些酶表現(xiàn)出 RNA 和 DNA 定向聚合酶活性。此外，逆轉(zhuǎn)錄酶催化 RNA-DNA 雜交體中 RNA 的降解。核酸外切活性沿 5＇ －－-> 3＇ 方向進(jìn)行。RNA 或 DNA 指導(dǎo)的活性需要模板（RNA 或 DNA）和引物。下面是反應(yīng)的示意圖：

Worthington 艾美捷 重組大腸桿菌逆轉(zhuǎn)錄酶的特性：

重組 HIV 逆轉(zhuǎn)錄酶由異二聚體組成，亞基的分子量為 66,000 和 51,000 道爾頓（p66/p51 異二聚體）

在 pH 8 時(shí)獲得佳活性。需要 Mg ++離子和巰基試劑。對(duì)于 RNA 轉(zhuǎn)錄，需要 RNA 模板和脫氧寡核苷酸引物。引物可以是 oligo dT 8-12 或具有隨機(jī)或特定序列的 DNA 的混合物。轉(zhuǎn)錄的所得 DNA 稱(chēng)為互補(bǔ) DNA (cDNA)。逆轉(zhuǎn)錄酶表現(xiàn)出DNA定向的DNA聚合酶。這種活性缺乏通常與細(xì)菌 DNA 依賴(lài)性 DNA 聚合酶相關(guān)的 3＇ －－-> 5＇ 核酸外切酶活性。

HIV 逆轉(zhuǎn)錄酶的第三種活性是 RNase H。RNase H 降解 RNA:DNA 雜合體中的 RNA。聚合酶和 RNase H 活性之間的結(jié)構(gòu)-功能關(guān)系分析表明，這兩種活性存在于分子的不同片段中。雖然聚合酶結(jié)構(gòu)域包含在 NH 2 -末端 51KDa 中，但 RNase H 活性位于 COOH - p66 亞基的末端 15KDa 中。

Worthington艾美捷逆轉(zhuǎn)錄酶，重組 HIV的應(yīng)用：

HIV逆轉(zhuǎn)錄酶用于艾滋病引物的研究。但是它可以替代AMV逆轉(zhuǎn)錄酶，后者主要用于將mRNA轉(zhuǎn)錄成雙鏈cDNA，可以插入到原核載體中。該酶還可以與單鏈 DNA 或 RNA 模板起使用，以制作用于雜交實(shí)驗(yàn)的探針。它可用于標(biāo)記具有突出 5＇ 末端的 DNA 片段的末端。當(dāng)大腸桿菌DNA 聚合酶 I 的 Klenow 片段或 T7 DNA 聚合酶產(chǎn)生不滿(mǎn)意的結(jié)果時(shí)，該酶還可用于通過(guò) Sanger 的雙脫氧鏈終止方法對(duì) DNA 進(jìn)行測(cè)序。

Worthington注于生物技術(shù)和生命科學(xué)研究，診斷，生物制藥和生物加工應(yīng)用的高質(zhì)量純化酶，蛋白質(zhì)，核酸和試劑盒。其核心酶包括：膠原蛋白酶，脫氧核糖核酸酶I，彈性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。

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