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為什么將Cell Counting Kit (CCK-8)作為細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)好選擇？
點(diǎn)擊次數(shù)：714 發(fā)布時(shí)間：2017/3/2
很多的科研的同學(xué)需要做增殖細(xì)胞增殖相關(guān)實(shí)驗(yàn)，而且想讓自己的實(shí)驗(yàn)比較有說服力，不少童鞋都是有請(qǐng)教大神做哪種實(shí)驗(yàn)的好，是CCK-8、WST-1、MTT法、XTT法哪種實(shí)驗(yàn)比較有說服力？這時(shí)候問題就來了為什么將Cell Counting Kit (CCK-8)作為細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)*佳選擇？看過來人的經(jīng)驗(yàn)之談。
Cell Counting Kit-8簡稱CCK-8試劑盒，是一種基于WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽），適用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒。
實(shí)驗(yàn)原理：
WST-8屬于MTT的升級(jí)產(chǎn)品，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物（formazan）。顏色的深淺與細(xì)胞的增殖成正比，與細(xì)胞毒性成反比。使用酶標(biāo)儀在450mM波長處測(cè)定OD值，間接反映活細(xì)胞數(shù)量。
為什么將Cell Counting Kit (CCK-8) 作為細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)*佳選擇：
如下表，CCK-8法與其他細(xì)胞增殖/毒性檢測(cè)方法的優(yōu)勢(shì)比較，結(jié)果不言而喻！
1、在96孔板中配置100 μl 的細(xì)胞懸液（2000-5000 cells）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)（37℃，5% CO2）。
2、向培養(yǎng)板加入10 μl 不同濃度的待測(cè)物質(zhì)。
3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間（例如：6、12、24或48小時(shí)）。
4、向每孔加入10 μl CCK-8溶液（不要讓孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）。
5、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。
6、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450 nm處的吸光度。
注：若暫時(shí)不測(cè)定OD值，可以向每孔中加入10 μl 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時(shí)內(nèi)測(cè)定，吸光度不會(huì)發(fā)生變化。如果待測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK-8之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響。當(dāng)然藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。
艾美捷作為Abbkine中國區(qū)域總代理，為客戶提供*具性價(jià)比的常規(guī)免疫學(xué)試劑，如各種標(biāo)簽抗體、內(nèi)參抗體、常規(guī)一抗以及全系列二抗，抗體檢測(cè)底物，蛋白質(zhì)純化產(chǎn)品以及相關(guān)試劑盒等。同時(shí)我們作為多家知名品牌的的中國代理或區(qū)域代理，艾美捷能為您提供系列的實(shí)驗(yàn)室解決方案。如果您對(duì)上述產(chǎn)品感興趣，請(qǐng)致電免費(fèi)客戶專線400-6800-868到艾美捷科技有限公司垂詢相關(guān)的產(chǎn)品信息及完整實(shí)驗(yàn)解決方案。文章來自： http://www.amyjet.com/featured/cck8-cell-counting-kit.shtml
Cell Counting Kit-8簡稱CCK-8試劑盒，是一種基于WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽），適用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒。
實(shí)驗(yàn)原理：
WST-8屬于MTT的升級(jí)產(chǎn)品，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物（formazan）。顏色的深淺與細(xì)胞的增殖成正比，與細(xì)胞毒性成反比。使用酶標(biāo)儀在450mM波長處測(cè)定OD值，間接反映活細(xì)胞數(shù)量。
為什么將Cell Counting Kit (CCK-8) 作為細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)*佳選擇：
如下表，CCK-8法與其他細(xì)胞增殖/毒性檢測(cè)方法的優(yōu)勢(shì)比較，結(jié)果不言而喻！
| 檢測(cè)方法 | MTT法 | XTT法 | WST-1法 | CCK-8法 |
| 甲臜產(chǎn)物的水溶性 | 差（需加有機(jī)溶劑溶解后再檢測(cè)） | 好 | 好 | 好 |
| 產(chǎn)品性狀 | 粉末 | 2瓶溶液 | 溶液 | 1瓶溶液 |
| 使用方法 | 配成溶液后使用 | 現(xiàn)配現(xiàn)用 | 即開即用 | 即開即用 |
| 檢測(cè)靈敏度 | 高 | 很高 | 很高 | 高 |
| 檢測(cè)時(shí)間 | 較長 | 較短 | 較短 | *短 |
| 檢測(cè)波長 | 560-600nm | 420-480nm | 420-480nm | 430-490nm |
| 細(xì)胞毒性 | 高，細(xì)胞形態(tài)完全消失 | 很低，細(xì)胞形態(tài)不變 | 很低，細(xì)胞形態(tài)不變 | 很低，細(xì)胞形態(tài)不變 |
| 試劑穩(wěn)定性 | 一般 | 較差 | 一般 | 很好 |
| 批量樣品檢測(cè) | 可以 | 非常適合 | 非常適合 | 非常適合 |
| 便捷程度 | 一般 | 便捷 | 便捷 | 非常便捷 |
* 細(xì)胞毒性非常低，因此加入WST-8顯色后，可以在不同時(shí)間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀數(shù)從而找到*佳測(cè)定時(shí)間
* 酚紅和血清對(duì)CCK法的檢測(cè)不會(huì)造成干擾（扣除空白孔即可）
CCK-8法細(xì)胞增殖-毒性檢測(cè)* 酚紅和血清對(duì)CCK法的檢測(cè)不會(huì)造成干擾（扣除空白孔即可）
| 產(chǎn)品名稱及描述 | 貨號(hào) | 產(chǎn)品說明 |
| Cell Counting Kit-8 (CCK-8) | KTC011001 | 詳情 |
1、在96孔板中配置100 μl 的細(xì)胞懸液（2000-5000 cells）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)（37℃，5% CO2）。
2、向培養(yǎng)板加入10 μl 不同濃度的待測(cè)物質(zhì)。
3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間（例如：6、12、24或48小時(shí)）。
4、向每孔加入10 μl CCK-8溶液（不要讓孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）。
5、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。
6、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450 nm處的吸光度。
注：若暫時(shí)不測(cè)定OD值，可以向每孔中加入10 μl 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時(shí)內(nèi)測(cè)定，吸光度不會(huì)發(fā)生變化。如果待測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK-8之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響。當(dāng)然藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。
艾美捷作為Abbkine中國區(qū)域總代理，為客戶提供*具性價(jià)比的常規(guī)免疫學(xué)試劑，如各種標(biāo)簽抗體、內(nèi)參抗體、常規(guī)一抗以及全系列二抗，抗體檢測(cè)底物，蛋白質(zhì)純化產(chǎn)品以及相關(guān)試劑盒等。同時(shí)我們作為多家知名品牌的的中國代理或區(qū)域代理，艾美捷能為您提供系列的實(shí)驗(yàn)室解決方案。如果您對(duì)上述產(chǎn)品感興趣，請(qǐng)致電免費(fèi)客戶專線400-6800-868到艾美捷科技有限公司垂詢相關(guān)的產(chǎn)品信息及完整實(shí)驗(yàn)解決方案。文章來自： http://www.amyjet.com/featured/cck8-cell-counting-kit.shtml