人類原發(fā)性和鹽敏感性高血壓與細(xì)胞色素P450的AA代謝差異有關(guān)（CYP）4A，具有AA-ω-羥化酶（20-HETE合成）活性。循環(huán)胰島素增加抑制20-肥胖高血壓受試者的HETE合成。 

近，CYP4F2基因變異增加了尿20-HETE的分泌，被發(fā)現(xiàn)與中國(guó)人群患高血壓的風(fēng)險(xiǎn)。

該試劑盒可用于測(cè)定促滲后血清、血漿、細(xì)胞和組織中的20-HETE和純化。

保存：如果所有組件在使用都儲(chǔ)存在適當(dāng)?shù)臏囟认拢撎准䦟@得較佳的效果。項(xiàng)目應(yīng)在收到此試劑盒后在指定溫度下儲(chǔ)存。所有部件都儲(chǔ)存在-20°C以下，并且不應(yīng)在必要時(shí)再次冷凍和解凍。

艾美捷Detroit R&D 生物靶標(biāo)20-HETE-ELISA試劑盒樣品制備：

表達(dá)細(xì)胞色素P450（CYP）4A/4F的細(xì)胞中的20-HETE測(cè)量

1.使用含有終濃度的約0.1 mM TPP（三苯基膦，0.03-0.05 mg/mL）。TPP是一種抗氧化劑，看起來(lái)像沉淀在樣品中，因?yàn)樗蝗菀兹芙�。在使用包含TPP，旋轉(zhuǎn)樣品以從樣品溶液中分離沉淀的TPP。

2.用乙酸將整個(gè)均化的細(xì)胞酸化至約3-4的pH。測(cè)量使用標(biāo)準(zhǔn)pH紙。

3.用乙酸乙酯萃取。向均質(zhì)細(xì)胞中加入等體積的乙酸乙酯渦流非常好。離心后，將上層有機(jī)相放入新鮮干凈的試管中。然后添加將另一等體積的乙酸乙酯加入均化細(xì)胞中，開(kāi)始第二次提取。它是強(qiáng)烈建議進(jìn)行三次提取。

4.從提取物中蒸發(fā)合并的乙酸乙酯，直到所有乙酸乙酯都在氬氣或氮?dú)庀赂稍餁怏w

5.皂化（如需要）

6.加入20μL N，N-二甲基甲酰胺（DMF），使干燥的殘留物溶解，用于重建。添加0.5 mL 1x樣品稀釋緩沖液（試劑盒中提供）制成溶液。在每個(gè)孔中加載100μL，以三份的形式在ELISA板上。（注意：我們建議在嘗試將結(jié)果擬合到標(biāo)準(zhǔn)曲線。例如，用50μL的剩余樣品加上3個(gè)孔50μL的1x樣品稀釋緩沖液，以及3個(gè)孔，其中10μL的其余樣品加上90μL的1x

樣品稀釋緩沖液。）

7.對(duì)20-HETE進(jìn)行ELISA（根據(jù)制造商的說(shuō)明）。

組織中的20-HETE測(cè)量：

1.將1g組織、4mL H2O和0.01mg TPP均勻化。

2.通過(guò)向每個(gè)勻漿中加入8μL乙酸來(lái)酸化勻漿。

3.用等量的乙酸乙酯提取，徹底渦旋，向下旋轉(zhuǎn)，收集有機(jī)物階段再重復(fù)兩次提取，將所有有機(jī)相合并。

4.用氬氣或氮?dú)飧稍镉袡C(jī)相。

5.皂化（如果需要）（參見(jiàn)細(xì)胞中的20-HETE測(cè)量）

6.用N，N-二甲基甲酰胺（DMF）溶解來(lái)自上述步驟#4的干燥殘留物。（添加約20μL的DMF以重新構(gòu)成干燥的殘留物。）

7.用1x樣品稀釋緩沖液進(jìn)一步稀釋：加入約0.5 mL 1x樣品稀釋劑緩沖并在室溫下以10000rpm離心5分鐘。上清液將用于ELISA。

8. 對(duì)20-HETE進(jìn)行ELISA（根據(jù)制造商的說(shuō)明）

血漿或血清中20-HETE的測(cè)量以下是使用1.0mL液體的起始體積測(cè)量血漿或血清中20-HETE的方案。啟動(dòng)也可以使用低于1.0mL的體積（例如，用于小鼠研究），通過(guò)制作適當(dāng)?shù)膶?duì)所有體積和稀釋度進(jìn)行比例調(diào)整。

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來(lái)源：https://www.amyjet.com/news/Detroit-R-D-new.shtml