熒光金的使用與其他熒光示蹤劑基本相同。主要區(qū)別在于Fluoro Gold在注射后存活時(shí)間、濃度范圍、組織治療以及與其他組織化學(xué)技術(shù)的兼容性方面更為靈活。

儲(chǔ)存和保質(zhì)期：干燥的熒光金應(yīng)保存在4攝氏度的不透光封閉容器中。正確儲(chǔ)存，F(xiàn)luoro Gold的保質(zhì)期應(yīng)超過(guò)一年。溶液中的染料也應(yīng)保存在4攝氏度的不透光封閉容器中，在這種情況下，它將保持穩(wěn)定至少六個(gè)月。

Vehicle：氟金可溶解在蒸餾水或0.9%鹽水中，或用作0.2M中性磷酸鹽緩沖液中的懸浮液。

染料濃度：氟金已在1-10%的濃度范圍內(nèi)成功使用。初，建議濃度為4%。如果注射部位出現(xiàn)不希望的壞死，或標(biāo)記過(guò)于強(qiáng)烈，則將濃度降低至2%溶液。如果需要使用更精確的測(cè)量，氟金的分子量為532.6道爾頓。

術(shù)后生存期

在兩天到兩個(gè)月的時(shí)間內(nèi)觀察到良好的逆行標(biāo)記。生存期通常為三到五天。長(zhǎng)的存活期增強(qiáng)了遠(yuǎn)端突起的填充，而不會(huì)使染料從細(xì)胞中擴(kuò)散。

固定

幾乎可以使用任何固定劑，或者不使用固定劑；經(jīng)常使用含有4%甲醛的磷酸鹽中性緩沖鹽水。含有高濃度重金屬（如鋨、汞）的固定劑會(huì)熄滅熒光，而高濃度（超過(guò)1%）的戊二醛可能會(huì)增加背景熒光。

Fluorochrome熒光金（FC10000）組織化學(xué)處理：

含氟金的組織可根據(jù)幾乎任何常見(jiàn)的組織學(xué)技術(shù)進(jìn)行處理。這包括未固定組織的冷凍切片（10µm）、固定組織的冰凍切片（20µm）和從塑料（2-4µm）或石蠟（3-10µm）中嵌入的組織切下的薄片。固定組織的冰凍切片是常用的。

組合方法

在處理的這一點(diǎn)上，可以進(jìn)一步處理切片以獲得第二標(biāo)記，例如放射自顯影、HRP

組織化學(xué)、免疫細(xì)胞化學(xué)、第二熒光示蹤劑、熒光復(fù)染等。

安裝、清理和滑蓋

切片通常安裝在涂有明膠的載玻片上，風(fēng)干，浸入二甲苯中，并用非熒光DPX塑料安裝介質(zhì)覆蓋。除非與第二種示蹤劑不兼容，否則切片可以用分醇脫水。如果熒光金與熒光免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)合，則將切片風(fēng)干并直接用中性緩沖甘油（1:2）覆蓋。

檢查和攝影

熒光金可以使用寬帶紫外激發(fā)濾光片在熒光顯微鏡下觀察。當(dāng)用中性pH緩沖液處理組織時(shí)發(fā)出金色，而當(dāng)用酸性（例如pH 3.3）pH緩沖液加工組織時(shí)發(fā)出藍(lán)色。它可以用數(shù)碼或膠片拍攝（彩色打印使用Ektachrome 200-400 ASA膠片，黑白打印使用同等速度的膠片，例如Tri-X）。大多數(shù)曝光時(shí)間范圍為10-60，取決于物鏡放大率和標(biāo)簽強(qiáng)度。三十（30）曝光約為平均值�？梢岳枚啻纹毓馔瑫r(shí)可視化熒光金和另一種示蹤劑。因此，UV將與亮場(chǎng)照射相結(jié)合，以在放射自顯影中同時(shí)定位熒光金與HRP或銀顆粒。類似地，藍(lán)光激發(fā)可以組合起來(lái)，也可以可視化FITC的綠色發(fā)射顏色，而綠色激發(fā)光可以用于同時(shí)觀察碘化丙啶或溴化乙錠（熒光復(fù)染劑）的紅色發(fā)射顏色。

Fluorochrome熒光金（FC10000）其他信息：

對(duì)于通過(guò)微量注射器或微量移液管進(jìn)行的壓力注射，F(xiàn)luoro Gold應(yīng)溶解在蒸餾水中或0.9%鹽水中。氟金也可用作2M中性磷酸鹽緩沖液中的懸浮液，然而，懸浮顆�？赡軙�(huì)堵塞細(xì)的微量移液管尖端，因此蒸餾水或0.9%鹽水是選載體。對(duì)于離子電滲療法，1%的氟金溶液在1M乙酸緩沖液（pH=3.3）中配制。清潔良好（95%ETOH，水）的玻璃微量移液管尖端應(yīng)為10-20µm。佳的離子電滲參數(shù)是在10-20分鐘內(nèi)用脈沖電流（4-10開(kāi)啟，4-10關(guān)閉）輸送+1至+5u安培。

實(shí)際上，任何中樞或外周神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)都可以注射Fluoro Gold進(jìn)行逆行轉(zhuǎn)運(yùn)分析。在外周神經(jīng)系統(tǒng)中，可以研究神經(jīng)節(jié)和外周目標(biāo)。對(duì)于周?chē)窠?jīng)的研究，應(yīng)切斷或損傷神經(jīng)，并浸入或注射aq。5%氟金溶液。由于Fluoro Gold不會(huì)被完整的通過(guò)纖維顯著吸收，因此纖維必須被切割或嚴(yán)重?fù)p壞才能吸收染料。

運(yùn)輸和生存時(shí)間

熒光金被用作逆行軸突示蹤劑，盡管確實(shí)發(fā)生了正向軸突運(yùn)輸。應(yīng)改變存活時(shí)間（特別是12小時(shí)-2天的短存活時(shí)間），以大限度地提高所研究的特定神經(jīng)元系統(tǒng)中的正遷移。對(duì)于逆行運(yùn)輸，存活時(shí)間應(yīng)從4天到14天不等。大多數(shù)系統(tǒng)需要7到10天的時(shí)間，盡管長(zhǎng)路徑（如脊髓到腦干）和大型哺乳動(dòng)物（如貓、猴子）的路徑可能需要更長(zhǎng)的生存時(shí)間（如14天）。此外，由于熒光金在逆行標(biāo)記神經(jīng)元內(nèi)保持快速，幾個(gè)月的存活時(shí)間也將產(chǎn)生好的結(jié)果。對(duì)于離子電滲療法，建議2-5天的存活時(shí)間。據(jù)估計(jì)，哺乳動(dòng)物每天的運(yùn)輸量約為2厘米；冷氣球慢一點(diǎn)

來(lái)源：https://www.amyjet.com/products/FC10000.shtml