艾美捷Advanced Targeting Systems /ATSbio Fab pHast小鼠可在1天內(nèi)對(duì)小鼠主要抗體的特異性、結(jié)合性和內(nèi)在化進(jìn)行定量測(cè)試。該二綴合物用于評(píng)估一抗體內(nèi)化的潛力。制作1.5毫升“Fab pHast加標(biāo)溶液”將使用約43微克Fab pHast。這是假設(shè)500 nM的加標(biāo)溶液，并在96孔板上進(jìn)行測(cè)定，這是方案中的建議量。這足以在8種不同濃度的抗體下測(cè)試六份（6個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)）的1種抗體。

圖2：Fab pHast小鼠與192-IgG:HEK-293細(xì)胞，用p75神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素轉(zhuǎn)染在96孔板中以20000個(gè)細(xì)胞/孔接種受體并允許其粘附過(guò)夜。10 nM的192 IgG抗體（Cat.#AB-N43）在室溫下孵育圖1：Fab pHast小鼠的pH響應(yīng)：熒光（RFU）為顯示為Fab pHast小鼠（Cat.pH-02). 酸性越強(qiáng)熒光，而堿性pH幾乎沒(méi)有熒光。將1µl或0.9µg添加到99µl 50mM中底部讀數(shù)為96的不同pH值的磷酸鉀-井板。在平板混合器上輕輕混合平板5分鐘，并在Spectra Max上讀取雙子座EM（Ex:532nm/EM:560nm）。

溫度與30nM Fab pHast小鼠（Cat.#PH-02）持續(xù)20分鐘。Fab pHast結(jié)合抗體為然后加入細(xì)胞中，在平板上輕輕混合2分鐘攪拌機(jī)。將細(xì)胞孵育過(guò)夜內(nèi)部化，盡管可以檢測(cè)到內(nèi)部化幾小時(shí)內(nèi)。用PBS代替培養(yǎng)基更高的靈敏度，然后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分析使用Y3放大20倍的熒光顯微鏡徠卡濾鏡立方體。

艾美捷Advanced Targeting Systems/ATSbio Fab pHast小鼠特異性和制備：

該二綴合物識(shí)別小鼠抗體。Fab pHast是山羊抗鼠單價(jià)抗體和pH依賴性熒光報(bào)告物的化學(xué)偶聯(lián)物。用于制造Fab pHast的抗體小鼠是針對(duì)小鼠IgG重鏈和輕鏈的親和純化的多克隆抗體。這個(gè)本品中使用的抗體將在免疫球蛋白類(lèi)及其亞類(lèi)之間發(fā)生交叉反應(yīng)因?yàn)樗鼈児蚕硐嗤妮p鏈（kappa或lambda）。pHast熒光染料具有激發(fā)波長(zhǎng)532nm，發(fā)射大值為560nm。

使用和儲(chǔ)存：

Fab pHast小鼠產(chǎn)生對(duì)您的初細(xì)胞的特異性、結(jié)合性和內(nèi)在化的定量測(cè)試小鼠抗體，結(jié)果在1天內(nèi)。該次共軛物用于評(píng)估初抗體內(nèi)化。材料可能有很多不同；工作稀釋度必須由終用戶確定。如果是一個(gè)新的批次，您必須在開(kāi)始完整的實(shí)驗(yàn)方案之評(píng)估適當(dāng)?shù)墓ぷ飨♂尪�。使用輕輕旋轉(zhuǎn)材料；5-10的縮微膠片就足夠了。材料應(yīng)為儲(chǔ)存于2-6°C，避光。您可以添加穩(wěn)定劑，如BSA（1-10 mg/ml）或甘油穩(wěn)定性和/或防腐劑如疊氮化鈉（2mM）。在這些條件下，材料具有穩(wěn)定的保質(zhì)期。

Advanced Targeting Systems(ATSbio)主要研究域包含神經(jīng)靶向毒素，神經(jīng)生物學(xué)研究方面的抗體/蛋白，靶向劑內(nèi)化水平檢測(cè)工具等。艾美捷科技是ATSbio的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。

來(lái)源：https://www.amyjet.com/brand/Advanced-Targeting-Systems.shtml