艾美捷硝酸鹽/亞硝酸鹽熒光測定試劑盒提供了一種簡單的兩步過程中測量硝酸鹽/硝酸鹽總濃度的準確和方便的方法。步是利用硝酸還原酶將硝酸鹽轉(zhuǎn)化為亞硝酸鹽。第二步是加入DAN（以酸性溶液形式提供），然后加入NaOH，以增強熒光產(chǎn)物1（H）-萘三唑的檢測。測量該化合物的熒光可準確測定NO濃度。

艾美捷硝酸鹽/亞硝酸鹽熒光法檢測試劑盒：

樣品制備

該試劑盒已在培養(yǎng)基和血漿中驗證。使用以下特殊說明，有必要從這些來源中提純一些樣品。采集后，將樣品儲存在-20°C或-80°C。

培養(yǎng)基

一些類型的組織培養(yǎng)基含有非常高的硝酸鹽水平（例如RPMI 1640）。如果實驗的目標是測量硝酸鹽水平的微小變化，則這些類型的培養(yǎng)基不應(yīng)用于細胞培養(yǎng)。細胞硝酸鹽/亞硝酸鹽的產(chǎn)生可以通過從細胞生長期間存在的硝酸鹽/亞硝酸鹽總水平中減去培養(yǎng)基中存在的硝酸酯/亞硝酸鹽水平（在沒有細胞的情況下）來定量。酚紅和胎牛血清可顯著降低熒光強度。只要可能，這些成分應(yīng)排除在培養(yǎng)基之外。介質(zhì)組分對熒光強度的影響必須通過在測定中使用的介質(zhì)量存在的情況下繪制亞硝酸鹽或硝酸鹽標準曲線來評估。為了獲得大的信號響應(yīng)，好將樣本量限制在10或20µl�？梢允褂酶唧w積的樣品（終反應(yīng)體積的30-50%），然而，在這些條件下熒光可以顯著猝滅。為了在介質(zhì)存在的情況下制作標準曲線，只需制備硝酸鹽或亞硝酸鹽標準曲線（見第15頁），用所需的介質(zhì)量代替測定緩沖液。對于硝酸鹽和亞硝酸鹽的測量，反應(yīng)完成需要培養(yǎng)一小時。

血漿和血清

使用市售離心機或微量超濾裝置通過10或30kDa分子量截止過濾器對血漿和血清樣品進行超濾。這一過程將去除血紅蛋白，從而導(dǎo)致熒光強度的急劇降低。使用多10µl濾液測定硝酸鹽和/或亞硝酸鹽。硝酸鹽轉(zhuǎn)化為亞硝酸鹽需要1-2小時，轉(zhuǎn)化率≥95%。

組織勻漿

將樣品在PBS（pH 7.4）中均勻化，并以10000 x g離心

20分鐘。以100000 x g離心30分鐘（100000 x g的離心是可選的，但會增加過濾速率。此外，在超濾之通過0.45微米過濾器過濾溶液可以提高超濾速率）。通過10或30kDa分子量截止過濾器（用超純水預(yù)沖洗）的超過濾器組織勻漿。使用10µl濾液測定硝酸鹽和/或亞硝酸鹽。硝酸鹽轉(zhuǎn)化為亞硝酸鹽需要兩小時，轉(zhuǎn)化率≥95%。

艾美捷硝酸鹽/亞硝酸鹽熒光法檢測試劑盒相關(guān)文獻：

1.Moncada, S. The L-arginine: nitric oxide pathway. Acta Physiol. Scand. 145, 201-227 (1992).

2.Nathan, C. Nitric oxide as a secretory product of mammalian cells. FASEB Journal 6, 3051-3064 (1992).

3.Miles, A.M., Chen, Y., Owens, M.W., et al. Fluorometric determination of

nitric oxide. Methods 7, 40-47 (1995).

4.Misko, T.P., Schilling, R.J., Salvemini, D., et al. A fluorometric assay for the measurement of nitrite in biological samples. Anal. Biochem. 214, 11-16 (1993).

5.Miles, A.M., Chen, Y., Owens, M.W., et al. Fluorometric determination of nitric oxide. Methods 7, 40-47 (1995).

來源：https://www.amyjet.com/products/780051-2.shtml