癌癥發(fā)展和生長的一個共同特征是轉(zhuǎn)化細胞的生存能力在“非錨固”或“球狀”生長條件下。這種對失巢癥的抵抗顯示與細胞穩(wěn)態(tài)喪失、癌癥生長和轉(zhuǎn)移有關。抑制ECM上的細胞粘附、擴散和生長是細胞愈合過程的障礙，因此使其成為可能的治療靶點。防止失巢，增強細胞粘附和擴散是細胞移植技術發(fā)展的一個主要目標，包括祖細胞。旨在控制失巢抗凋亡分子機制的進一步研究將有助于確定治療許多人類惡性腫瘤的有效療法。

細胞失巢凋亡檢測試劑盒提供比色和熒光格式測量錨定非依賴性生長并監(jiān)測失巢細胞死亡。該套件包含足夠的試劑用于在Poly-Hema涂層的24孔板中測定24個樣品。活細胞是用MTT或Calcein AM檢測。用埃塞俄比亞同二聚體（EthD-1）檢測細胞死亡。

艾美捷細胞失巢凋亡檢測試劑盒測定原理：

細胞在聚Hema涂層板或?qū)φ瞻逯信囵B(yǎng)。通過MTT或鈣素AM。通過Ethidium Homodimer（EthD-1）測量失巢細胞死亡。EthD-1是一種用于測量死細胞的優(yōu)良標記。EthD-1是一種紅色熒光染料，只能穿透受損的細胞膜。EthD-1在結合ssDNA時將以40倍的增強發(fā)出熒光，dsDNA、RNA、寡核苷酸和三鏈DNA。背景熒光水平非常低因為染料在與細胞相互作用之實際上是非熒光的。

艾美捷細胞失巢凋亡檢測試劑盒化驗方案：

1.制備含有0.1-2.0 x 106的細胞懸浮液細胞/ml。細胞可以被處理具有失巢增強或抑制試劑。

2.將0.5mL細胞懸浮液添加到抗錨定板的每個孔或?qū)φ?4孔細胞中培養(yǎng)板。在37ºC和5%CO2下培養(yǎng)細胞24-72小時。時間和培養(yǎng)條件將取決于所使用的細胞系，并且可能需要由用戶調(diào)整。

3.進行MTT比色法或Calcein AM/EthD-1熒光法檢測。

艾美捷細胞失巢凋亡檢測試劑盒MTT比色檢測：

1.將50µL MTT試劑添加到抗錨定板或?qū)φ?/span>24的每個孔中-井板。

2.在37ºC下孵育孔2-4小時或過夜。偶爾用倒置的顯微鏡檢查是否存在紫色沉淀。

3.向每個孔中加入500µL洗滌劑溶液。用移液管輕輕混合溶液。

4.蓋上盤子，使其避光，并在室溫下在黑暗中孵育2-4小時。

5.將200µL轉(zhuǎn)移到96孔板中，并在微量滴定板讀取器。

下圖顯示了CytoSelect的典型結果細胞失巢凋亡檢測試劑盒。以下數(shù)據(jù)僅供參考。該數(shù)據(jù)不應用于解釋實際后果。

圖：人胸成纖維細胞BJ-TERT細胞的失活測定。BJ-TERT細胞以50000個細胞/孔接種在組織培養(yǎng)對照板或Poly-Hema涂層板中。細胞是允許培養(yǎng)24小時。通過MTT和Calcein AM測定細胞活力用EthD-1染色失巢樣細胞死亡。

細胞失巢凋亡檢測試劑盒文獻引用：

1. Bates RC, Buret A, van Helden DF, Horton MA, Burns GF. (1994) J Cell Biol 125, 403-415.

2. Frisch SM, Francis H. (1994) J Cell Biol 124, 619-626.

3. Frisch SM, Screaton RA. (2001) Curr Opin Cell Biol 13, 555-562.

4. Meredith JE, Jr Fazeli B, Schwartz MA. (1993) Mol Biol Cell 4, 953-961.

5. Rak J, Mitsuhashi Y, Erdos V, Huang SN, Filmus J, Kerbel RS. (1995) J Cell Biol 131, 1587-1598.

來源：https://www.amyjet.com/products/CBA-080.shtml