產(chǎn)品展示
艾美捷細(xì)胞低密度脂肪酸(LDL)攝取試劑盒的功能&應(yīng)用
點(diǎn)擊次數(shù)：0發(fā)布時(shí)間：2022/11/30 16:35:42
更新日期：2022/11/30 16:35:42
所 在 地：中國(guó)大陸
產(chǎn)品型號(hào)：
優(yōu)質(zhì)供應(yīng)
詳細(xì)內(nèi)容
LDL是血液中膽固醇的主要載體，占血漿總膽固醇的60%以上。LDL通過(guò)apoB-100-LDL受體相互作用引發(fā)的受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用被肝組織和肝外組織吸收。內(nèi)化的LDL顆粒被運(yùn)送到溶酶體，在溶酶體中降解為游離膽固醇和氨基酸。在人類中，肝臟是LDL分解代謝和LDL受體活性重要的器官。在肝臟中，LDL可以通過(guò)藥物干預(yù)來(lái)調(diào)節(jié)。
細(xì)胞低密度脂肪酸(LDL)攝取試劑盒為研究細(xì)胞水平的LDL攝取和調(diào)節(jié)提供了方便的工具。該試劑盒使用與DyLight結(jié)合的人LDL™ 550（Thermo Fisher Scientific Inc.的產(chǎn)品）作為熒光探針，用于檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)LDL的攝取。LDL受體特異性多克隆抗體和DyLight™ 488綴合的二抗體用于鑒定LDL受體的分布。
艾美捷細(xì)胞低密度脂肪酸(LDL)攝取試劑盒為研究細(xì)胞水平的LDL攝取和調(diào)節(jié)提供了便利的工具。該試劑盒采用人類低密度脂蛋白結(jié)合到DyLight™ 550作為熒光探針，用于檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞中LDL的攝取。LDL受體特異性多克隆抗體和DyLight™ 包括488個(gè)偶聯(lián)的二抗，用于鑒定LDL受體的分布。
艾美捷細(xì)胞低密度脂肪酸(LDL)攝取試劑盒試劑準(zhǔn)備：
1.LDL-DyLightTM 550工作溶液
稀釋LDL DyLight™ 550（項(xiàng)目編號(hào)10011229）1:100，在適當(dāng)?shù)臒o(wú)血清培養(yǎng)基中。在加入細(xì)胞之，用0.45µm過(guò)濾器去除顆粒。
2.TBS-Triton緩沖液
通過(guò)將Triton X-100添加到TBS中制備TBS Triton緩沖液
濃度為0.1%。
3.兔抗LDL受體一抗體
在TBS Triton緩沖液中稀釋兔抗LDL受體一抗體（項(xiàng)目編號(hào)10012422）1:100。
4.DyLightTM 488偶聯(lián)山羊抗兔IgG二抗體
稀釋DyLight™ 488綴合的山羊抗兔IgG二抗體（項(xiàng)目號(hào)10011231），1:100，TBS Triton緩沖液。
細(xì)胞處理和LDL DyLightTM 550的攝取：
以下方案適用于96孔板。對(duì)于其他尺寸的板，應(yīng)相應(yīng)調(diào)整每個(gè)孔的介質(zhì)/溶液體積。我們建議每種治療重復(fù)或三次。
1.用3 x 104個(gè)細(xì)胞/孔接種96孔板，并培養(yǎng)細(xì)胞過(guò)夜。對(duì)于HepG2細(xì)胞，在治療使細(xì)胞生長(zhǎng)兩天。
2.第二天或第三天，用實(shí)驗(yàn)化合物或載體處理細(xì)胞24小時(shí)，或在典型實(shí)驗(yàn)方案中使用的時(shí)間段。
3.治療期結(jié)束時(shí)，用75-100µl/孔LDL DyLight替換培養(yǎng)基™ 550在無(wú)血清培養(yǎng)基中制備的工作溶液。將細(xì)胞在37°C下再培養(yǎng)3-24小時(shí)，或在典型實(shí)驗(yàn)方案中使用的時(shí)間。
4.在LDL攝取培養(yǎng)結(jié)束時(shí)，抽吸培養(yǎng)基并用新鮮培養(yǎng)基或PBS代替。在顯微鏡下用能夠分別測(cè)量激發(fā)波長(zhǎng)540和發(fā)射波長(zhǎng)570nm的濾光器檢查L(zhǎng)DL攝取的程度。細(xì)胞現(xiàn)在準(zhǔn)備好使用第8頁(yè)所述的程序?qū)DL受體進(jìn)行免疫熒光染色。
艾美捷細(xì)胞低密度脂肪酸(LDL)攝取試劑盒性能特性：
圖：Huh7人肝細(xì)胞LDL攝取。將Huh7細(xì)胞以1 x 104個(gè)細(xì)胞/孔接種在96孔板中，并使其附著和生長(zhǎng)24小時(shí)。將LDL DylightTM 550以1:100的稀釋度加入無(wú)血清培養(yǎng)基中并孵育過(guò)夜。通過(guò)將Hoechst 33342（項(xiàng)目編號(hào)15547）直接添加到培養(yǎng)基中至終濃度為5µM并在37°C下孵育30分鐘，對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行染色。LDLR染色如試劑盒手冊(cè)所述完成。使用配備Roper Scientific相機(jī)和MetaMorph軟件的尼康Eclipse顯微鏡拍攝熒光圖像（200X），并合并到ImageJ中。圖A：綠色LDLR染色，圖B：紅色LDL攝取，圖C：藍(lán)色Hoechst，圖D：合并圖像。
