膜聯(lián)蛋白V是具有血管抗凝血活性的鈣和磷脂結(jié)合蛋白家族的成員。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，它可能通過(guò)與凝血酶原競(jìng)爭(zhēng)磷脂酰絲氨酸（PS）結(jié)合位點(diǎn)而在抑制凝血中發(fā)揮作用。在健康細(xì)胞中，PS通常保存在細(xì)胞膜的內(nèi)小葉（胞質(zhì)側(cè)）。當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，早的可檢測(cè)指標(biāo)是膜不對(duì)稱性的喪失。PS不再局限于膜的胞質(zhì)部分，而是轉(zhuǎn)移到外小葉，并暴露在細(xì)胞表面。免疫化學(xué)技術(shù)公司的牛膜聯(lián)蛋白V-熒光素細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒提供了一種經(jīng)驗(yàn)證的方法，可使用重組熒光素結(jié)合的牛膜連蛋白V和碘化丙啶（PI）快速、輕松地區(qū)分兩個(gè)死亡細(xì)胞群和活細(xì)胞群。具有完整細(xì)胞膜和表面暴露PS（凋亡的一個(gè)顯著特征）的細(xì)胞將被膜聯(lián)蛋白V-熒光素染色為陽(yáng)性。PI包含在試劑盒中，用于識(shí)別已喪失質(zhì)膜完整性的晚期凋亡細(xì)胞。這些細(xì)胞將被膜聯(lián)蛋白V-熒光素和碘化丙啶雙重標(biāo)記（綠色和紅色熒光）。假設(shè)沒(méi)有治療或細(xì)胞周期相關(guān)事件暫時(shí)暴露正常內(nèi)化的帶負(fù)電荷的PS實(shí)體，具有完整質(zhì)膜的活的非凋亡細(xì)胞將排除PI，并且將保持不被膜聯(lián)蛋白V-熒光素探針染色。該試劑盒還包括一種特殊配制的鈣基結(jié)合緩沖液，這是發(fā)生膜聯(lián)蛋白V結(jié)合所需的。使用流式細(xì)胞儀分析結(jié)果。

ImmunoChemistry艾美捷牛膜聯(lián)蛋白V-熒光素凋亡檢測(cè)試劑盒化學(xué)性質(zhì)：

靶細(xì)胞凋亡

激發(fā)/發(fā)射膜聯(lián)蛋白V-熒光素–494 nm/521 nm PI–536 nm/617 nm

分析方法流式細(xì)胞術(shù)

樣品類型細(xì)胞培養(yǎng)

儲(chǔ)存2-8°C

協(xié)議：

準(zhǔn)備樣品和對(duì)照品。

用DiH2O稀釋10X結(jié)合緩沖液1:10。

在冰冷的培養(yǎng)基或PBS中清洗細(xì)胞兩次，然后以5 x 105–1 x 106細(xì)胞/mL的速度重新懸浮在冰冷的1X結(jié)合緩沖液中。

在1mL膜聯(lián)蛋白重組緩沖液（1X）中重組牛膜聯(lián)蛋白V-熒光素。

在PBS中稀釋重組膜聯(lián)蛋白V-熒光素1:5。

將稀釋的Annexin V-Fluorescein以約1:10添加到每個(gè)樣品中。

在PBS中稀釋PI 1:10。

以約1:20的比例向每個(gè)樣品中加入稀釋的PI。

在冰上孵育15分鐘，避光。

向每個(gè)樣本添加400µL 1X綁定緩沖液。

用流式細(xì)胞儀分析。膜聯(lián)蛋白V-熒光素在494nm激發(fā)，在521nm發(fā)射。PI在536nm激發(fā)，在617nm發(fā)射。

ImmunoChemistry艾美捷牛膜聯(lián)蛋白V-熒光素凋亡檢測(cè)試劑盒組分：

Bovine Annexin V-Fluorescein, lyophilized, 1 vial, #6641

Annexin Reconstitution Buffer, 1X, 1 mL, 1 vial, #6639

Annexin Binding Buffer, 10X, 10 mL, 3 bottles, #6640

Propidium Iodide, 250 µg/mL, 1 mL, 1 vial, #638

ImmunoChemistry Technologies簡(jiǎn)稱"ICT",提供各種細(xì)胞蛋白酶、細(xì)胞凋亡與細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒等研究工具，同時(shí)包含高質(zhì)量高靈敏度的 ELISA開(kāi)發(fā)試劑。艾美捷科技是ImmunoChemistry的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。

來(lái)源：https://www.amyjet.com/brand/Immunochemistry.shtml