細胞裂解活性是清除細胞內病原體和癌細胞的重要過程。ICT的總細胞毒性檢測試劑盒允許您評估細胞培養(yǎng)中的細胞溶解活性。總細胞毒性測定試劑盒包括三種熒光試劑：CFSE、7-AAD和SR-FLICA。CFSE是一種綠色熒光膜染色劑，用于識別目標細胞群。加入未染色的效應細胞并與靶細胞孵育。SR-LFICA試劑與細胞一起孵育以鑒定那些含有活性胱天蛋白酶的細胞。然后加入7-AAD，一種紅色熒光活/死染色劑，通過結合膜受損細胞的DNA將所有壞死細胞染成紅色。通過流式細胞術，量化四種細胞群：活細胞、早期凋亡細胞、晚期凋亡細胞和壞死細胞。總細胞毒性試劑盒中的這種進一步的細胞分化導致更準確的細胞溶解活性評估。

ImmunoChemistry艾美捷總細胞毒性試驗試劑盒化學性質：

試劑名稱7-AAD、CFSE、SR-VAD-FMK

靶細胞介導的細胞毒性，多胱天蛋白酶

激發(fā)/發(fā)射7-AAD–546 nm/647 nm CFSE–492 nm/520 nm SR-FLICA–565 nm/600 nm

分析方法流式細胞術

樣品類型細胞培養(yǎng)

存儲CFSE≤ -20°C，2-8°C時的其他部件

協(xié)議：

準備樣品和對照品

用diH2O稀釋1:10的分析緩沖液并過濾消毒。

用200µL DMSO重新配制CFSE，并用1X測定緩沖液稀釋1:250。

向目標細胞中加入200µL CFSE，使其呈綠色，并在室溫下孵育15分鐘。

清洗目標細胞并調整細胞濃度。

向靶細胞中加入效應細胞并孵育4-6小時。

用100µL DMSO重組SR-FLICA并稀釋1:12.6。

添加10µL SR-FLICA，將凋亡細胞標記為橙紅色，并在37°C下孵育45分鐘。

用260µL DMSO重組7-AAD，并用1X測定緩沖液稀釋1:10。

加入20µL 7-AAD標記壞死細胞為紅色，并在冰上孵育10分鐘。

運行對照并用流式細胞儀進行分析。通過分析FL-1（綠色）與FL-3（紅色）來識別目標細胞。創(chuàng)建FL-2（橙色-紅色）與FL-3（紅色）的繪圖。CFSE在492nm激發(fā)，在520-540nm發(fā)射；7-AAD在546nm激發(fā)并在647nm發(fā)射；SR-FLICA在565nm激發(fā)，在600nm發(fā)射。

ImmunoChemistry艾美捷總細胞毒性試驗試劑盒組分：

Kit 971: 125 Tests

SR-FLICA Reagent (SR-VAD-FMK), 1 vial, #6221

CFSE target cell stain, 1 vial, #6162

7-AAD vital stain, 1 vial, #6163

10X Assay Buffer, 30 mL, #6161

Kit Manual

Kit 972: 250 Tests

SR-FLICA Reagent (SR-VAD-FMK), 2 vials, #6221

CFSE target cell stain, 1 vial, #6162

7-AAD vital stain, 2 vials, #6163

10X Assay Buffer, 60 mL, #685

Kit Manual

ImmunoChemistry Technologies簡稱"ICT",提供各種細胞蛋白酶、細胞凋亡與細胞毒性檢測試劑盒等研究工具，同時包含高質量高靈敏度的 ELISA開發(fā)試劑。艾美捷科技是ImmunoChemistry的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質的產品與服務。

來源：https://www.amyjet.com/brand/Immunochemistry.shtml