在這里，艾美捷Jackson詳細(xì)介紹了如何建立多重標(biāo)記實(shí)驗(yàn)，以及執(zhí)行成功分析所需的一些注意事項(xiàng)。

圖：小鼠GFAP（綠色）、NF（紅色）、膠原蛋白IV（灰色）、波形蛋白（藍(lán)色）z1。圖片由加州大學(xué)圣巴巴拉分校神經(jīng)科學(xué)研究所Gabe Luna提供。

Jackson丨艾美捷：設(shè)計(jì)多重標(biāo)記實(shí)驗(yàn)

同時(shí)檢測(cè)一種以上抗原的抗體選擇取決于至少兩個(gè)重要標(biāo)準(zhǔn)：

Jackson丨艾美捷：二抗體的可用性不識(shí)別

彼此（來(lái)自相同的寄主物種），

分析系統(tǒng)中使用的其他初抗體，

研究中的組織或細(xì)胞中存在內(nèi)源性免疫球蛋白。

使用分辨率良好的探針（酶反應(yīng)產(chǎn)物、熒光團(tuán)或電子致密顆粒）。

多標(biāo)簽協(xié)議生成器

這個(gè)工具可以幫助你設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)。它將應(yīng)用上述標(biāo)準(zhǔn)來(lái)確定一抗體之間的潛在交叉反應(yīng)性，從而確定每個(gè)二抗體所需的zui小交叉反應(yīng)性。

輸入樣本的種類(lèi)和您打算使用的抗體。優(yōu)先對(duì)所有二抗體使用相同的宿主物種，以zui小化交叉反應(yīng)的可能性�？乖Q(chēng)可以通過(guò)直接在表中編輯文本來(lái)定制。

請(qǐng)注意，即使工具有所指示，也可能無(wú)法獲得每個(gè)潛在的zui小交叉反應(yīng)性排列。山羊和驢子通常是J佳的二抗體宿主物種選擇，因?yàn)樗鼈兙哂?/span>zui小的交叉反應(yīng)性。

標(biāo)記來(lái)自同一宿主物種的初抗體

親和純化二抗體的單價(jià)Fab片段可覆蓋（阻斷）免疫球蛋白的表面，用于同一宿主物種的雙重標(biāo)記一抗體，或阻斷組織切片或細(xì)胞表面的內(nèi)源性免疫球蛋白。它們可以用于這些目的，因?yàn)?/span>Fab片段只有一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)（即它們是單價(jià)的）。

標(biāo)記與樣本來(lái)自同一物種的初抗體

有時(shí)可能需要使用與樣本來(lái)自同一物種的初抗體，例如鼠對(duì)鼠。在這些情況下，二抗體也可能檢測(cè)到內(nèi)源性免疫球蛋白，導(dǎo)致不必要的背景。這可以通過(guò)Fab片段阻斷來(lái)避免。

進(jìn)一步考慮

出于一般阻斷目的，來(lái)自與二抗體宿主相同物種的正常血清（5%v/v）為非特異性、保守序列和/或Fc受體結(jié)合提供了有效的背景降低。

二抗體的單價(jià)Fab片段可以阻斷抗體的特定不良反應(yīng)。這種阻斷適用于標(biāo)本和初抗體屬于同一物種的情況（例如，小鼠貼上標(biāo)簽），或在同一宿主動(dòng)物中產(chǎn)生多個(gè)初抗體的情況。

可視化

成功的多重標(biāo)記取決于探頭的使用，探頭的信號(hào)可以通過(guò)可用設(shè)備區(qū)分。

熒光顯微鏡是多重標(biāo)記的通用平臺(tái)，因?yàn)闉V波器組被設(shè)計(jì)用于區(qū)分可用的多種熒光團(tuán)。窄帶通發(fā)射濾波器對(duì)于從多個(gè)熒光團(tuán)中分離信號(hào)、抑制重疊光譜中的熒光檢測(cè)至關(guān)重要。當(dāng)計(jì)劃多重標(biāo)記協(xié)議時(shí)，用熒光團(tuán)配制染料面板，其發(fā)射光譜分離良好，與可用儀器兼容。

Jackson ImmunoResearch注于親和純化的二抗和純化免疫球蛋白研究，服務(wù)于大學(xué)科研所和醫(yī)院里的動(dòng)物研究以及生物醫(yī)學(xué)研究機(jī)構(gòu)的科學(xué)家。艾美捷科技是Jackson的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。

來(lái)源：https://www.amyjet.com/brand/jackson-china-distributor.shtml