熒光團(tuán)是科學(xué)研究的重要工具。它們廣泛用于免疫測(cè)定技術(shù)，例如流式細(xì)胞術(shù)、免疫組織化學(xué) (IHC) 和熒光顯微鏡，其中熒光團(tuán)偶聯(lián)的二抗可提供目標(biāo)分析物的可視化。與比色或化學(xué)發(fā)光檢測(cè)相比，熒光檢測(cè)的主要優(yōu)勢(shì)在于它可以實(shí)現(xiàn)多路復(fù)用。無論您是使用熒光標(biāo)記的二抗來單獨(dú)顯示單個(gè)靶標(biāo)，還是進(jìn)行復(fù)雜的多色研究，在熒光團(tuán)選擇過程中都需要牢記幾個(gè)重要因素。

這期的主題是Jackson ImmunoResearch公司為大家講解：為基于抗體的研究選擇熒光團(tuán)。

、Jackson：什么是熒光團(tuán)？

熒光團(tuán)是吸收特定波長(zhǎng)范圍內(nèi)的光（激發(fā)）并在另個(gè)更長(zhǎng)的波長(zhǎng)范圍內(nèi)發(fā)射（發(fā)射）的分子。激發(fā)和發(fā)射發(fā)生的波長(zhǎng)范圍稱為激發(fā)和發(fā)射光譜。對(duì)于每個(gè)熒光團(tuán)，都有個(gè)佳波長(zhǎng)，在該波長(zhǎng)處熒光團(tuán)被有效地激發(fā)（激發(fā)大值）。同樣，對(duì)于任何特定的激發(fā)大值，發(fā)射光譜具有熒光信號(hào)強(qiáng)的波長(zhǎng)（發(fā)射大值）。激發(fā)和發(fā)射過程是循環(huán)的，僅在熒光團(tuán)受損（光漂白）時(shí)結(jié)束。這種損壞通常是由于長(zhǎng)時(shí)間暴露于激發(fā)光源造成的。

二、Jackson公司：熒光團(tuán)如何用于科學(xué)研究？

熒光團(tuán)用于許多研究應(yīng)用，常用于免疫測(cè)定技術(shù)，例如流式細(xì)胞術(shù)、免疫組織化學(xué) (IHC)、蛋白質(zhì)印跡、熒光 ELISA (FLISA) 和免疫細(xì)胞化學(xué) (ICC)。在這里，熒光團(tuán)共軛二抗用于結(jié)合識(shí)別目標(biāo)分析物的目標(biāo)特異性抗。使用標(biāo)記的多克隆二抗的主要優(yōu)點(diǎn)是它們提供信號(hào)放大，因?yàn)槎鄠�(gè)二抗可以結(jié)合每個(gè)抗。標(biāo)記的二抗還為研究人員在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中提供了高度的靈活性，因?yàn)閺V泛的二抗-熒光團(tuán)偶聯(lián)物很容易獲得。

三、Jackson公司：有哪些典型的熒光團(tuán)？

研究人員可以使用許多不同的熒光團(tuán)，并且隨著新染料的開發(fā)，選項(xiàng)列表繼續(xù)增加。Alexa Fluor®、DyLight™ 和 Cy™ 以及近可用的熒光團(tuán)如Brilliant Violet™ 染料。此外，熒光蛋白 R-藻紅蛋白 (R-PE)、別藻藍(lán)蛋白 (APC) 和 Peridinin-葉綠素蛋白 (PerCP) 也可用于流式細(xì)胞術(shù)等特定應(yīng)用。后者受益于J高的亮度和離散的激發(fā)和發(fā)射光譜。些較新的熒光團(tuán)旨在填補(bǔ)現(xiàn)有染料之間的光譜間隙，以便研究人員可以構(gòu)建更大的多路復(fù)用面板。

四、Jackson公司：在熒光團(tuán)選擇過程中哪些特征很重要？

為科學(xué)研究選擇熒光團(tuán)時(shí)的主要考慮因素是面板設(shè)計(jì)。由于熒光團(tuán)標(biāo)記的二抗主要用于多重實(shí)驗(yàn)，因此選擇彼此兼容的熒光團(tuán)以及與檢測(cè)和分析它們的儀器兼容是至關(guān)重要的。

建議使用明亮的熒光團(tuán)（例如 PE、Alexa Fluor® 488）來檢測(cè)弱表達(dá)的目標(biāo)，而不太明亮的熒光團(tuán)（例如 FITC）與更豐富的分析物配對(duì)。通過考慮每個(gè)熒光團(tuán)的激發(fā)和發(fā)射光譜，大限度地減少光譜重疊并避免背景干擾也很重要。另個(gè)明智的策略是確認(rèn)當(dāng)多個(gè)熒光團(tuán)標(biāo)記的二抗組合時(shí)產(chǎn)生的染色與單抗體染色相匹配；這將排除因不同抗體混合在起而產(chǎn)生的任何交叉反應(yīng)或阻斷效應(yīng)。理想情況下，在開始多次染色實(shí)驗(yàn)之，應(yīng)包括使用單個(gè)熒光團(tuán)偶聯(lián)物的適當(dāng)控制。

要記住的另個(gè)重要因素是所有熒光團(tuán)都應(yīng)妥善儲(chǔ)存，遠(yuǎn)離光線。過期試劑應(yīng)與較新試劑起測(cè)試，以確保亮度沒有受到影響。些熒光團(tuán)可能對(duì)常見的固定和通透緩沖液敏感，突出了對(duì)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行仔細(xì)優(yōu)化的必要性。后，某些熒光團(tuán)可能與某些細(xì)胞類型或結(jié)構(gòu)非特異性結(jié)合。盡管可以使用封閉緩沖液來防止這種情況，但重要的是要檢查它們是否可以與同面板中的其他熒光團(tuán)起使用。

Jackson公司注于親和純化的二抗和純化免疫球蛋白研究，服務(wù)域覆蓋各大學(xué)科研所和醫(yī)院里的動(dòng)物研究以及生物醫(yī)學(xué)研究機(jī)構(gòu)的科學(xué)家。艾美捷科技是Jackson公司的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。

來源：https://www.amyjet.com/brand/jackson-china-distributor.shtml