艾美捷worthington優(yōu)化技術(shù)：細(xì)胞定量

為了有效地評(píng)估每個(gè)程序，量化每個(gè)解離步驟的結(jié)果非常重要。建議使用細(xì)胞計(jì)數(shù)室（血細(xì)胞計(jì)數(shù)器）進(jìn)行產(chǎn)量定量，并使用臺(tái)盼藍(lán)進(jìn)行活力定量。概述了使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器進(jìn)行細(xì)胞產(chǎn)量定量；但是，此程序的新手可以參考更詳細(xì)的討論（參見(jiàn) Freshney，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，第 227 頁(yè)）。

艾美捷worthington細(xì)胞定量所需用品：

改進(jìn)的 Neubauer 血細(xì)胞計(jì)數(shù)器

細(xì)胞兼容培養(yǎng)基或 BSS

巴斯德移液器或微量移液器

顯微鏡 (10X)

柜臺(tái)

艾美捷worthington細(xì)胞定量程序：

1.用 70% 異丙醇仔細(xì)清潔計(jì)數(shù)室表面和血細(xì)胞計(jì)的蓋玻片，并使其風(fēng)干。小心不要刮傷這些表面。

2.用試劑水潤(rùn)濕蓋玻片的側(cè)面，并將蓋玻片對(duì)準(zhǔn)計(jì)數(shù)室。

3.使用巴斯德移液器或微量移液器取充分混合的 20-50 µl 等分的解離細(xì)胞懸液，僅將細(xì)胞吸入尖端。通過(guò)將移液器的尖端放在腔室邊緣并讓腔室通過(guò)毛細(xì)作用完全充滿(mǎn)，立即將細(xì)胞懸浮液轉(zhuǎn)移到計(jì)數(shù)室。不要過(guò)度或不足填充腔室。

4.對(duì)血細(xì)胞計(jì)數(shù)器另側(cè)的第二個(gè)腔室使用另個(gè)等分樣品重復(fù)此過(guò)程。

5.將血細(xì)胞計(jì)數(shù)器放在顯微鏡臺(tái)上，并使用計(jì)數(shù)插圖10X 物鏡，注于計(jì)數(shù)室網(wǎng)格線。根據(jù)需要調(diào)整對(duì)比度以清楚地看到網(wǎng)格和分散的單元格。

6.通過(guò)緩慢移動(dòng)滑塊來(lái)調(diào)整字段區(qū)域，以獲得由三條線包圍的中心網(wǎng)格（見(jiàn)下圖）。計(jì)算此 1 mm ²區(qū)域中存在的單元格總數(shù)，包括位于頂部和左側(cè)邊界上的單元格，不包括位于右側(cè)和底部邊界上的單元格。

7.為了準(zhǔn)確計(jì)數(shù)至少 100-500 個(gè)細(xì)胞。根據(jù)產(chǎn)量和密度，可以計(jì)算更多或更少的面積。

8.重復(fù)第二個(gè)室的計(jì)數(shù)。如果不存在第二個(gè)腔室，則應(yīng)清潔載玻片并重復(fù)該過(guò)程。

計(jì)算：

C = Ñ x 10 ⁴

其中 C = 每毫升細(xì)胞數(shù)

Ñ = 計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)的平均值

10 ⁴ = 1 mm ₂的體積轉(zhuǎn)換系數(shù)

總產(chǎn)量 = C x V

其中 V = 細(xì)胞總體積 (ml)

例子：

計(jì)數(shù)1 = 183 個(gè)細(xì)胞/mm ²

計(jì)數(shù)2 = 175 個(gè)細(xì)胞/mm ²

細(xì)胞體積 = 55 ml

C = 178.5 x 10 ⁴ = 1,785,000 個(gè)細(xì)胞/ml

總產(chǎn)量 = C x V = 1785,000 x 55 = 98,175,000 個(gè)細(xì)胞

注意：為獲得佳效果，細(xì)胞密度應(yīng)至少為每毫升10 ⁵ 個(gè)細(xì)胞。常見(jiàn)錯(cuò)誤是由于在取樣細(xì)胞懸浮液混合不當(dāng)和/或在裝載血細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)室之允許細(xì)胞在移液管中沉淀。避免對(duì)多個(gè)細(xì)胞聚集體進(jìn)行計(jì)數(shù)；聚集體的存在表明解離不完全，這可能需要進(jìn)步優(yōu)化分離參數(shù)。單細(xì)胞懸液提供佳結(jié)果。

Worthington注于高質(zhì)量純化酶，蛋白質(zhì)，核酸和試劑盒。其核心酶產(chǎn)品包括：膠原蛋白酶，脫氧核糖核酸酶I，彈性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。艾美捷科技是Worthington的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。

來(lái)源:https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml