艾美捷worthington優(yōu)化技術(shù)：優(yōu)化策略

查看Worthington 組織解離指南的參考文獻(xiàn)，了解特定組織和感興趣的細(xì)胞類型，然后將此信息應(yīng)用于組織解離的實(shí)際應(yīng)用。

基本優(yōu)化策略的示例如下：

根據(jù)引用的酶、工作濃度和使用的緩沖液或培養(yǎng)基系統(tǒng)，設(shè)置類似于表中列出的接近的可用參考的建議初步解離條件。

如果大多數(shù)相似的參考程序引用了種以上的酶，則在添加輔助酶之優(yōu)化主酶的濃度（相對(duì)濃度高的酶）。例如，如果兩個(gè)相似的參考文獻(xiàn)引用膠原酶 0.1% 和 DNase 0.01%，膠原酶 0.075% 和透明質(zhì)酸酶 0.025%，則在評(píng)估透明質(zhì)酸酶或脫氧核糖核酸酶的效果之，憑經(jīng)驗(yàn)優(yōu)化膠原酶濃度。

在優(yōu)化主要酶的濃度和孵育條件后，評(píng)估任何次要酶。

初將主要酶的濃度相對(duì)于參考程序改變約 50%。上述膠原酶濃度為 0.1% 和 0.075% 的例子表明酶濃度在 0.025% 和 0.15% 之間的評(píng)估。濃度增量應(yīng)均勻分布以覆蓋整個(gè)范圍。因此，將指示 0.025%、0.05%、0.075%、0.10%、0.125% 和 0.15% 的增量濃度。為了簡(jiǎn)化初始篩選，可以選擇中間范圍，在評(píng)估產(chǎn)量和活力結(jié)果后，可以決定是否需要進(jìn)步研究。在這種情況下，評(píng)估的初始膠原酶濃度可以是 0.05%、0.075%、0.10% 和 0.125%。

從歷史上看，大多數(shù)組織解離和細(xì)胞分離方案都引用了以每單位體積重量 (w/v) 表示的酶濃度。然而，近，些研究人員開始以活性為基礎(chǔ)使用酶，即每毫升單位 (u/ml)。使用任何種方法，但要考慮每種方法的優(yōu)缺點(diǎn)：

a) 傳統(tǒng)的每單位體積重量法很可能是由于使用了較粗的、部分純化的酶混合物，并且與可能存在的任何特定或污染活性無關(guān)地使用。對(duì)于這些粗制品中的些，批次間的差異可能很大，導(dǎo)致添加的酶活性量的重量差異高達(dá)兩倍。

b) 通過活性添加可能導(dǎo)致添加到解離的重量可能存在兩倍的差異；但是，根據(jù)每批的主要活性對(duì)使用的效力進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。

這兩種方法都忽略了相對(duì)的污染物活動(dòng)水平。在建立基本方法后，考慮對(duì)不同批次的酶進(jìn)行預(yù)取樣以評(píng)估這些因素并選擇對(duì)特定應(yīng)用的關(guān)鍵參數(shù)影響小的大量酶。

艾美捷worthington重要提示：為了準(zhǔn)確評(píng)估特定程序的性能，應(yīng)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)量和活力進(jìn)行定量和比較。在優(yōu)化基本解離和分離條件后，還應(yīng)評(píng)估代謝功能或受體結(jié)合能力等特定應(yīng)用參數(shù)�；谶@些結(jié)果，可以判斷該方法適合使用或重新優(yōu)化以更高地保留天然細(xì)胞特征。

Worthington注于高質(zhì)量純化酶，蛋白質(zhì)，核酸和試劑盒。其核心酶產(chǎn)品包括：膠原蛋白酶，脫氧核糖核酸酶I，彈性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。艾美捷科技是Worthington的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。

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