·方法和材料

·使用酶

·基本原代細(xì)胞分離

·95%O 2 :5%CO 2平衡

·研磨

·酶促細(xì)胞收獲

·細(xì)胞粘附和收獲

·用于細(xì)胞收獲的胰蛋白酶

·細(xì)胞釋放程序

接下來(lái)起來(lái)看看worthington組織解離的方法和材料：用 95% O ₂ :5% CO ₂平衡。

在許多細(xì)胞分離程序中，對(duì)于解離過(guò)程中組織的存活來(lái)說(shuō)，培養(yǎng)介質(zhì)在生理 pH 值下既要充氧又要緩沖是很重要的。當(dāng)培養(yǎng)基與 95%O ₂ :5%CO ₂平衡時(shí)，這兩個(gè)要求都得到了滿足。幾種平衡鹽溶液含有對(duì) pH 值敏感的指示劑染料酚紅。當(dāng)它呈紅色或紫色時(shí)，介質(zhì)太堿性。當(dāng)將組織置于解離酶溶液中時(shí)，有時(shí)會(huì)發(fā)生這種情況。孵育通常需要用 O ₂ :CO ₂重新平衡。

氣體不應(yīng)直接鼓入任何含有蛋白質(zhì)的溶液中。這會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)起泡和變性，失去生物活性。氣體可通過(guò) 0.22 微米膜過(guò)濾器或通過(guò)無(wú)菌纖維塞（例如無(wú)菌巴斯德或容量移液管中的棉塞）進(jìn)行消毒。在混合溶液的同時(shí)，使O ₂ :CO ₂連續(xù)通過(guò)液體上方的空間，直到顏色指示 pH 值為 7.2-7.4。平衡鹽溶液通常預(yù)先充氣，但每次打開瓶子時(shí)都應(yīng)使用無(wú)菌O ₂ :CO ₂進(jìn)行平衡。

無(wú)論氧化/碳酸化程度如何，緩沖平衡鹽溶液通常會(huì)保持恒定的 pH 值，因此更容易使用。某些細(xì)胞類型可能對(duì)特定的緩沖鹽敏感。參考表可用于為特定應(yīng)用選擇合適的平衡鹽溶液、緩沖液或解離介質(zhì)。

艾美捷worthington組織表（參考，按組織類型和物種分組） 

脂肪/脂肪 腎上腺 骨 腦

軟骨 冒號(hào) 內(nèi)皮 上皮

眼睛 心 腸 腎

肝 肺 淋巴結(jié) 乳腺

各種各樣的 肌肉 神經(jīng) 胰腺

腮腺 垂體 列腺 生殖

秤 皮膚 脾 干

胸腺 甲狀腺/甲狀旁腺 扁桃體 瘤

注意：Worthington并未將列出的參考文獻(xiàn)僅限于那些使用 Worthington 酶的論文。般而言，Worthington 提供的組織解離酶可互換用于所引用的大多數(shù)制劑。

Worthington注于高質(zhì)量純化酶，蛋白質(zhì)，核酸和試劑盒。其核心酶產(chǎn)品包括：膠原蛋白酶，脫氧核糖核酸酶I，彈性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。艾美捷科技是Worthington的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。

來(lái)源:https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml