使用酶

基本原代細(xì)胞分離

95%O 2 :5%CO 2平衡

研磨

酶促細(xì)胞收獲

細(xì)胞粘附和收獲

用于細(xì)胞收獲的胰蛋白酶

細(xì)胞釋放程序

然后接下來主要講的是如何使用酶？

艾美捷worthington為組織解離應(yīng)用提供的所有酶均以凍干粉形式提供，以提供方便、多功能和穩(wěn)定性。因此，它們可在 2 - 8°C 下儲(chǔ)存，無需特殊處理即可運(yùn)輸。雖然凍干使酶的運(yùn)輸和儲(chǔ)存更容易，但在打開任何小瓶時(shí)都需要特別小心。

凍干的蛋白質(zhì)往往具有很強(qiáng)的吸濕性，因此不應(yīng)在潮濕的地方打開它們。確保任何小瓶在打開已達(dá)到室溫。理想情況下，小瓶應(yīng)在打開至少半小時(shí)從冰箱中取出，并放在干燥器中。在打開任何小瓶之，請(qǐng)確保它摸起來點(diǎn)也不涼。只要遵循這些預(yù)防措施，本節(jié)中引用的所有細(xì)胞分離酶都可以反復(fù)加熱至室溫，然后放回冰箱。

旦用培養(yǎng)基或緩沖液稀釋，蛋白水解酶就會(huì)發(fā)生自溶。使用立即溶解酶。

必須特別注意脫氧核糖核酸酶 (DNASE)。該產(chǎn)品很容易發(fā)生剪切變性。輕輕混合。

重組酶不應(yīng)儲(chǔ)存在 2 - 8°C。如有必要，可以將它們等分并在 -20°C 下冷凍。避免重復(fù)凍融循環(huán)。

所有酶在重組后都可以通過 0.22 µm 孔徑的膜進(jìn)行無菌過濾。

般來說，細(xì)胞分離過程中使用的大多數(shù)酶（胰蛋白酶除外）可以直接溶解在平衡鹽溶液或選擇的緩沖液中。初應(yīng)通過在 0.001 N HCl 中重構(gòu)酶來制備胰蛋白酶的儲(chǔ)備溶液。該溶液可以在使用立即稀釋到消化培養(yǎng)基或緩沖液中。

下表是艾美捷worthington列出的標(biāo)準(zhǔn)平衡鹽溶液及其參考文獻(xiàn)，有助于選擇合適的解離溶液。

a  Amounts are given as grams per liter of solution

b  In some instances the values given represent calculations from data presented by the authors to account for the use of hydrated or anhydrous salts

c  S. Ringer, J. Physiol. (London) 18, 425 (1895)

d  M.V. Tyrode, Arch. Int. Pharmacodyn. Ther., 20, 2025 (1910)

e  R.C. Parker, Methods of Tissue Culture, 3rd ed., p. 57, Harper, New York, 1961

f  G.O. Gey ａnd M.K. Hey, Am J. Cancer, 27, 55 (1936)

g  W.R. Earle, J. Natl. Cancer Inst, 4, 165 (1943)

h  T.T. Puck, S.J. Cieciura, ａnd A. Robinson, J. Exp. Med. 108, 945 (1958)

i  J.H. Hanks ａnd R.E. Wallace, Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 71, 196 (1949)

j  PBS, phosphate-buffered saline

k  R. Dulbecco ａnd M. Vogt, J. Exp. Med., 99, 167 (1954)

Worthington注于高質(zhì)量純化酶，蛋白質(zhì)，核酸和試劑盒。其核心酶產(chǎn)品包括：膠原蛋白酶，脫氧核糖核酸酶I，彈性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。艾美捷科技是Worthington的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。

來源：https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml