為了有效地評(píng)估每個(gè)程序，量化每個(gè)解離步驟的結(jié)果非常重要。建議使用細(xì)胞計(jì)數(shù)室（血細(xì)胞計(jì)數(shù)器）進(jìn)行產(chǎn)量定量，并使用臺(tái)盼藍(lán)進(jìn)行活力定量。概述了使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器進(jìn)行細(xì)胞產(chǎn)量定量；但是，此程序的新手可以參考更詳細(xì)的討論（參見 Freshney，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，第 227 頁）。

艾美捷Worthington優(yōu)化技術(shù)所需用品：

改進(jìn)的 Neubauer 血細(xì)胞計(jì)數(shù)器

細(xì)胞兼容培養(yǎng)基或 BSS

巴斯德移液器或微量移液器

顯微鏡 (10X)

柜臺(tái)

艾美捷Worthington細(xì)胞定量程序：

1.用 70% 異丙醇仔細(xì)清潔計(jì)數(shù)室表面和血細(xì)胞計(jì)的蓋玻片，并使其風(fēng)干。小心不要刮傷這些表面。

2.用試劑水潤濕蓋玻片的側(cè)面，并將蓋玻片對(duì)準(zhǔn)計(jì)數(shù)室。

3.使用巴斯德移液器或微量移液器取充分混合的 20-50 µl 等分的解離細(xì)胞懸液，僅將細(xì)胞吸入尖端。通過將移液器的尖端放在腔室邊緣并讓腔室通過毛細(xì)作用完全充滿，立即將細(xì)胞懸浮液轉(zhuǎn)移到計(jì)數(shù)室。不要過度或不足填充腔室。

4.對(duì)血細(xì)胞計(jì)數(shù)器另側(cè)的第二個(gè)腔室使用另個(gè)等分樣品重復(fù)此過程。

5.將血細(xì)胞計(jì)數(shù)器放在顯微鏡臺(tái)上，并使用計(jì)數(shù)插圖10X 物鏡，注于計(jì)數(shù)室網(wǎng)格線。根據(jù)需要調(diào)整對(duì)比度以清楚地看到網(wǎng)格和分散的單元格。

6.通過緩慢移動(dòng)滑塊來調(diào)整字段區(qū)域，以獲得由三條線包圍的中心網(wǎng)格。計(jì)算此 1 mm 2區(qū)域中存在的單元格總數(shù)，包括位于頂部和左側(cè)邊界上的單元格，不包括位于右側(cè)和底部邊界上的單元格。

7.為了準(zhǔn)確計(jì)數(shù)至少 100-500 個(gè)細(xì)胞。根據(jù)產(chǎn)量和密度，可以計(jì)算更多或更少的面積。

8.重復(fù)第二個(gè)室的計(jì)數(shù)。如果不存在第二個(gè)腔室，則應(yīng)清潔載玻片并重復(fù)該過程。

注：Worthington 的組織解離酶可互換用于所引用的大多數(shù)制劑。

Worthington核心酶：包括：膠原蛋白酶，脫氧核糖核酸酶I，彈性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。

Worthington主要研究覆蓋生物技術(shù)和生命科學(xué)研究，診斷，生物制藥和生物加工應(yīng)用的高質(zhì)量純化酶，蛋白質(zhì)，核酸和試劑盒。艾美捷科技是Worthington的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。

來源：https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml