1916 年，Rous 和 Jones 使用“Merck、Brubler 和 Kahlbaum 的胰蛋白酶粉末”消化活細(xì)胞在其中生長的血漿凝塊，以獲得用于傳代培養(yǎng)的細(xì)胞懸液。1934 年，Vogelaar 和 Erlichman 是下個(gè)研究人員，他們利用粗胰蛋白酶制劑中的消化酶來液化人成纖維細(xì)胞在傳代培養(yǎng)之生長的凝固血漿。Scherer、Syverton 和 Gey 于 1953 年引入了類似于天使用的胰蛋白酶技術(shù)，以收獲當(dāng)時(shí)新培養(yǎng)的 HeLa 細(xì)胞株，用于繼代培養(yǎng)和生化分析。這些工作人員測試了重結(jié)晶胰蛋白酶和 NF 1:250 胰蛋白酶用于細(xì)胞收獲，發(fā)現(xiàn)純化的胰蛋白酶更有效，對(duì)細(xì)胞的毒性更小。盡管如此，NF 1：

相對(duì)粗制的胰腺制劑如 NF 1:250 胰蛋白酶天仍然用于細(xì)胞收獲，盡管它們表現(xiàn)出相當(dāng)大的批次間變異性并含有外來物質(zhì)和其他酶活性。粗胰蛋白酶中的雜質(zhì)會(huì)對(duì)細(xì)胞造成不必要的損害并降低克隆效率。使用更高純度的結(jié)晶胰蛋白酶可以消除許多這些困難。

NF 1:250 材料中存在的任何污染物似乎都不是細(xì)胞收獲活性所必需的，因?yàn)榧兓囊鹊鞍酌笇?duì)單層解離非常有效，而且粗制 NF 1:250 胰蛋白酶加大豆胰蛋白酶抑制劑無效。

McKeehan 和 Ham 報(bào)告說，在低溫（即 4°C）下用結(jié)晶胰蛋白酶收獲時(shí)，在低血清培養(yǎng)基中單細(xì)胞的活力和增殖潛力顯著提高。

艾美捷Worthington細(xì)胞釋放程序：

為了將單層培養(yǎng)中的細(xì)胞從個(gè)培養(yǎng)容器轉(zhuǎn)移或傳遞到另個(gè)培養(yǎng)容器，有必要將細(xì)胞從單層釋放到懸浮液中，以便可以通過移液和稀釋輕松處理它們。

從單層釋放細(xì)胞幾乎總是使用純化的胰蛋白酶通過稱為胰蛋白酶化的過程來完成。通常的胰蛋白酶消化過程在下面的插圖中進(jìn)行了詳細(xì)說明。

艾美捷Worthington胰蛋白酶消化程序：

1.從細(xì)胞中去除培養(yǎng)基。

2.添加無菌胰蛋白酶溶液（在 BSS 平衡鹽溶液中，通常不含鈣的 Hanks。

3.讓胰蛋白酶溶液在室溫或 37°C（或 4°C 更長時(shí)間）下作用于單層幾分鐘。

4.輕輕去除胰蛋白酶溶液，以免干擾細(xì)胞。

5.添加 BSS 或培養(yǎng)基（通常含有血清或胰蛋白酶抑制劑以滅活殘留的胰蛋白酶）并攪拌容器以破壞單層細(xì)胞并懸浮細(xì)胞。

些研究人員發(fā)現(xiàn)，使用結(jié)晶胰蛋白酶的程序可以提高細(xì)胞釋放后的活力。活力通常通過測量克隆效率來確定，即單個(gè)細(xì)胞附著在培養(yǎng)容器壁上并分裂產(chǎn)生染色后肉眼可見的細(xì)胞集落的能力。

注：Worthington 的組織解離酶可互換用于所引用的大多數(shù)制劑。

Worthington核心酶：包括：膠原蛋白酶，脫氧核糖核酸酶I，彈性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。

Worthington主要研究覆蓋生物技術(shù)和生命科學(xué)研究，診斷，生物制藥和生物加工應(yīng)用的高質(zhì)量純化酶，蛋白質(zhì)，核酸和試劑盒。艾美捷科技是Worthington的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。

來源：https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml