大多數(shù)在體外生長的非惡性細(xì)胞四處移動(dòng)并分裂，直到它們形成個(gè)細(xì)胞厚的單層，完全覆蓋培養(yǎng)容器的表面。當(dāng)達(dá)到匯合時(shí)，運(yùn)動(dòng)和增殖通常會(huì)停止。為研究、加工或繼代培養(yǎng)而收獲細(xì)胞需要解離和分離單層。用胰蛋白酶對(duì)細(xì)胞層進(jìn)行有限處理是常用的方法。

以認(rèn)為胰蛋白酶制劑只是水解種蛋白質(zhì)粘合物質(zhì)，這種物質(zhì)負(fù)責(zé)使細(xì)胞牢固地附著在它們的基質(zhì)上，從而使細(xì)胞從培養(yǎng)容器中分離出來�，F(xiàn)在認(rèn)為胰蛋白酶在細(xì)胞收獲中的作用機(jī)制更為復(fù)雜。

艾美捷Worthington方法和材料：細(xì)胞粘附和收獲

在間期，培養(yǎng)中的成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞以特征性的紡錘形結(jié)構(gòu)分布在基質(zhì)上。關(guān)于細(xì)胞粘附的實(shí)際區(qū)域是分布在細(xì)胞的大部分下表面還是位于細(xì)胞邊緣附近的相對(duì)狹窄的斑塊中，主要是在起皺活動(dòng)附近，存在意見分歧。在任何種情況下，這些粘附區(qū)域似乎都是由附著點(diǎn)簇組成，每個(gè)附著點(diǎn)的直徑約為 1 µm。各個(gè)附著點(diǎn)顯然是與基質(zhì)結(jié)合的細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)的遠(yuǎn)端部分。

在將培養(yǎng)的細(xì)胞置于低溫、螯合劑或胰蛋白酶溶液后的幾分鐘內(nèi)，它們會(huì)通過四舍五入和起泡而急劇改變形狀。電子顯微照片顯示許多直徑為 0.25 - 0.5 µm 的長回縮纖維從圓形細(xì)胞體表面延伸到先位于扁平細(xì)胞下表面的擴(kuò)大的末端燈泡附著點(diǎn)。

細(xì)胞保持附著在基質(zhì)上，直到纖維斷裂，或者通過敲擊或搖動(dòng)培養(yǎng)容器進(jìn)行機(jī)械斷裂，或者通過螯合劑和/或胰蛋白酶的持續(xù)作用進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)。（單獨(dú)的低溫足以圍成圓形，但不足以分離。這些條件也大大減少了胰蛋白酶進(jìn)入細(xì)胞。）細(xì)胞從培養(yǎng)容器表面分離后不久，傳代培養(yǎng)到含有無胰蛋白酶培養(yǎng)基的新容器中，細(xì)胞質(zhì)流入斷裂的回縮纖維并重新填充它們。個(gè)小時(shí)內(nèi)，圓形細(xì)胞開始呈現(xiàn)出它們特有的形狀。

注：Worthington 的組織解離酶可互換用于所引用的大多數(shù)制劑。

Worthington核心酶：包括：膠原蛋白酶，脫氧核糖核酸酶I，彈性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。

Worthington主要研究覆蓋生物技術(shù)和生命科學(xué)研究，診斷，生物制藥和生物加工應(yīng)用的高質(zhì)量純化酶，蛋白質(zhì)，核酸和試劑盒。艾美捷科技是Worthington的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。

來源：https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml