艾美捷Worthington 逆轉錄酶、重組 HIV化學性質(zhì)：

單位定義：個單位在 37°C、pH 8.3 條件下，使用 poly(A)/oligo(dT)12-18 作為模板/引物在 20 分鐘內(nèi)將 1 nmole 氚化 d-TMP 加入酸可沉淀產(chǎn)品中。

注意：目的檢測使用更有效的模板/引物組合，與我們之的檢測相比，比活性增加了大約兩倍。因此，Worthington 的包裝尺寸包含相同數(shù)量的蛋白質(zhì)，其活性是新測定的兩倍。

艾美捷Worthington 逆轉錄酶、重組 HIV測定：

單元定義：個單元將 1 納摩爾氚化 dTMP 加入酸不溶性產(chǎn)物中，使用 poly(A)•oligo(dT) 12-18作為模板引物，在 37°C 下 20 分鐘。

試劑：

0.05 M Tris，pH 8.3，含有 0.008 M MgCl 2

1 mg/ml 多聚腺苷酸水溶液（聚 A）

DNA引物：寡核苷酸d(T) 12-18

1 μ 摩爾 dTTP/mL 儲備溶液

[甲基- 3 H]-胸苷 5＇-三磷酸 ( 3 H-dTTP)

dTTP- 3 H-dTTP 工作混合物：每毫升 100 nmol/mL dTTP 添加 1-2 μL 3 H-dTTP，以獲得 1 至 1.5 x 10 5 cpm/mL

1% 牛血清白蛋白

10% 高氯酸

1% 高氯酸

緩沖底物反應混合物：新鮮制備，臨用：

每 1mL 反應混合物所需混合物：

0.7 mL Tris/HCl，pH 8.3，0.008M MgCl 2

0.3 mL 1 mg/mL poly(A) RNA 模板

0.005 mL 0.02 mg /mL oligo d(T) 12-18 DNA 引物

0.02mL 1% BSA

酶：

根據(jù)需要用 0.05M Tris/HCl，pH 8.3，0.008M MgCl 2稀釋，含有 0.1 mg/mL (1%) BSA

程序：

如下移液器到每個管中：

緩沖底物混合物 0.1 毫升

dTTP- 3 H 3 -dTTP 0.1 毫升

酶 5-10 微升

在 37°C 下孵育 20 分鐘。加入 1 ml 10% 冷高氯酸終止反應。通過與 Millipore 真空歧管起使用的 0.2μ 歧管過濾器進行過濾。使用 2mL 1% 冷高氯酸/洗滌液洗滌四次。將過濾器轉移到閃爍瓶中。加入 2mL Cellosolve（或 2-甲氧基乙醇）溶解過濾器。添加 Cellosolve 后過濾器變得不透明。確保過濾器在繼續(xù)之溶解。加入 10mL 閃爍雞尾酒并計數(shù)。

艾美捷Worthington 逆轉錄酶、重組 HIV相關文獻：

1.Abbotts, J., ａnd Wilson, S.: Inhibitors of HIV-1 Reverse Transcriptase ａnd Fidelity of in vitro DNA Replication , J Enzym Inhib 6, 35, 1992

2.Abbotts, J., Jaju, M., ａnd Wilson, S.: Thermodynamics of A:G Mismatch Poly(dG) Synthesis by Human Immunodeficiency Virus 1 Reverse Transcriptase , J Biol Chem 266, 3937, 1991

3.Austermann, S., Kruhoffer, M., ａnd Grosse, F.: Inhibition of Human Immunodeficiency Virus Type-1 Reverse Transcriptase by 3＇-Blocked Oligonucleotide Primers , Biochem Pharmacol 43, 2581, 1992

Worthington核心酶：包括：膠原蛋白酶，脫氧核糖核酸酶I，彈性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。

Worthington主要研究覆蓋生物技術和生命科學研究，診斷，生物制藥和生物加工應用的高質(zhì)量純化酶，蛋白質(zhì)，核酸和試劑盒。艾美捷科技是Worthington的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務。

來源：https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml