蛋白酶 K 是種絲氨酸蛋白酶，對脂肪族、芳香族和其他疏水性氨基酸具有廣泛的特異性。PROK 的分子量為 27,000 道爾頓，并且是 Ca 2+依賴性的。它不會被 EDTA、巰基試劑、PCMB、TLCK 或 TPCK 等金屬離子螯合劑滅活。它還在 0.5% SDS 中保持活性。它可以被 PMSF 或 DFP 抑制。

艾美捷Worthington 蛋白酶 K化學性質(zhì)：

穩(wěn)定性/儲存： 凍干粉在 2-8°C 下可穩(wěn)定年。含 1mM CaCl 2的 50mM Tris-HCl，pH 8.0 溶液在 2-8°C 下可穩(wěn)定數(shù)月。儲存在 2-8°C。

單位定義：個單位在 37°C、pH 7.5 下，使用尿素變性血紅蛋白作為底物，釋放 1 微摩爾 Folin 陽性氨基酸，以酪氨酸計。

艾美捷Worthington 蛋白酶 K測定：

蛋白酶 K 測定：

Method : 蛋白酶 K 水解用尿素變性的血紅蛋白，并釋放 Folin Postive 氨基酸和肽，這些氨基酸和肽被確定為酪氨酸等價物。1 個單位在 37°C、pH 7.5 下以變性血紅蛋白為底物釋放 1 μ 摩爾 Folin 陽性氨基酸。

試劑：

0.05 N HCl - 稀釋 0.82 ml 濃 用試劑水將 HCl 稀釋至 200 ml。

0.5 M NaOH - 將 4.0 gm NaOH 溶解在 200 ml 試劑水中。

緩沖底物 - 將 2.0 gm 血紅蛋白溶解在 35 ml 試劑水中，加入 36.0 gm 尿素和 16 ml 0.5 M NaOH。在室溫下攪拌 30 - 60 分鐘。加入 0.618 克硼酸并攪拌。用 5 N HCl 將 pH 值調(diào)至 7.5，并用 qs 調(diào)至 100 ml。

酪氨酸標準品 (2.5 nmol/L) - 將 45.3 mg 酪氨酸溶解在 100 ml 0.05 N HCl 中。

Folin 試劑 - 將 10 ml Folin-Ciocalteus Phenol Reagent 添加到 20 ml 試劑水中。

酶：

將 10 mg 凍干材料溶解在 1 ml 試劑水中。使用立即用水準備 1:1000 稀釋液。

程序：

為空白、標準和測試標記透明玻璃試管。加入 2.5 ml 緩沖底物并在 37°C 下孵育 5 分鐘。向標準管中加入 0.2 ml 酪氨酸標準品，在測試中加入 0.2 ml 樣品，在空白中加入 0.2 ml 0.05 N HCl，開始反應。在 37°C 下孵育 10 分鐘。混合，然后向空白和標準中加入 0.2 ml 樣品，并在測試中加入 0.2 ml 0.05 N HCl�；旌喜⒃谑覝叵蚂o置 10 分鐘，過濾并用移液管將 1.0 ml 濾液、2.0 ml 0.5 N NaOH 和 0.6 ml Folin 試劑移入試管中。攪拌均勻。靜置 15 分鐘并讀取 A 578 nm。

艾美捷Worthington 蛋白酶 K相關(guān)文獻：

1.Bernabeu, C.、Conde, P.、Vasquez, D. 和 Ballesta, J.： 細菌核糖體的肽基轉(zhuǎn)移酶：對蛋白酶 K 的抗性， Eur J Biochem 93、527、1979

2.Betzel, C.、Pal, G.、Struck, M.、Jany, K. 和 Saenger, W.： 蛋白酶 K 的活性位點幾何：其與二肽氯甲基酮抑制劑的復合物的晶體學研究 ， FEBS Lett。197 , 105, 1986

3.Brdicka, D. 和 Krebs, W.： 通過蛋白酶定位酶 ， Biochim Biophys Acta 297、203、1972

Worthington核心酶：包括：膠原蛋白酶，脫氧核糖核酸酶I，彈性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。

Worthington主要研究覆蓋生物技術(shù)和生命科學研究，診斷，生物制藥和生物加工應用的高質(zhì)量純化酶，蛋白質(zhì)，核酸和試劑盒。艾美捷科技是Worthington的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務。

來源：https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml