單位定義：個(gè) Worthington 單位在 25°C、pH 7.0 下使用氨基安替比林和苯酚每分鐘分解 1µmole H 2 O 2 。

技術(shù)說明：RZ (Reinheitzahl) 是吸光度比率，A 403 /A 275，已被用作純度的指示。然而，Shannon et al., JBC, 241 , 266 (1966) 報(bào)道了同工酶的這個(gè)比率在 2.50 到 4.19 之間變化。這點(diǎn)，連同緩沖液和 pH 值的影響，似乎使這個(gè)比率作為純度標(biāo)準(zhǔn)的準(zhǔn)確性受到質(zhì)疑。

許多不同的方法用于過氧化物酶活性的測(cè)定。下面列出了由艾美捷Worthington確定的些近似轉(zhuǎn)換。

• 1 個(gè) Worthington 單位 = 4.6 個(gè) Worthington 以使用的鄰聯(lián)苯胺單位

• 1 個(gè) Worthington 單位 = 0.62 個(gè) ABTS 單位（每分鐘氧化的微摩爾染料，pH 6.0，25°C，1.7 mM 染料）

• 1 個(gè) Worthington 單位 = 2 個(gè) ABST 單位（ µmole 每分鐘氧化的染料，pH 5.0，25°C，8.7 mM 染料）

• 1 Worthington 單位 = 0.5 愈創(chuàng)木酚單位（每分鐘氧化愈創(chuàng)木酚的 µmole，pH 7.0，25°C）

• 1 Worthington 單位 = 0.5 連苯三酚到 purpogallin單位（mg 產(chǎn)品每 20 ，pH 6.0，20°C）

• 1 Worthington 單位 = 5 連苯三酚到 purpogallin 單位（在 pH 6.0，30°C 下每分鐘微摩爾產(chǎn)品）

艾美捷Worthington過氧化物酶的測(cè)定：

方法：傳統(tǒng)上，過氧化物酶活性以連苯三酚的氧化速率為單位表示，這是 Willstalter 和 Stoll 在 1917 年引入的種方法，近的研究表明這種方法有些不足。（Maehly 和 Chance 1954。）在過氧化物酶測(cè)定系統(tǒng)中已經(jīng)使用了多種氫供體，包括可能致癌的化合物，例如鄰聯(lián)茴香胺。采用 4-氨基安替比林作為氫供體的改進(jìn)測(cè)定法已被采用（Trinder 1966）。反應(yīng)速率通過測(cè)量過氧化氫分解引起的 510 nm 處吸光度的增加來確定。在指定條件下，在 25°C 和 pH 7.0 條件下，個(gè)單位會(huì)導(dǎo)致每分鐘分解 1 微摩爾過氧化氫。

試劑：

0.2 M 磷酸鉀緩沖液 pH 7.0

0.0017 M 過氧化氫。用試劑水將 1 ml 30% 過氧化氫（Merck Superoxol 或等效物）稀釋至 100 ml。用 0.2 M 磷酸鉀緩沖液 pH 7.0 將 1 ml 該溶液進(jìn)步稀釋至 50 ml。每天準(zhǔn)備新鮮。

0.0025 M 4-氨基安替比林和 0.17 M 苯酚：通過將 810 mg 苯酚溶解在 40 ml 試劑水中進(jìn)行制備。加入 25 mg 4-氨基安替比林并用試劑水稀釋至終體積為 50 ml。

酶：

以 1 mg/ml 溶解在試劑水中。臨用，進(jìn)步稀釋以獲得 0.02-0.04 ΔA/min 的速率。

程序：

將分光光度計(jì)調(diào)整到 510 nm 和 25°C。

將移液器移入每個(gè)比色皿，如下所示：

苯酚/氨基安替比林溶液 1.4 毫升

0.0017 M過氧化氫 1.5 毫升

在分光光度計(jì)中于 25°C 孵育 3-4 分鐘以達(dá)到溫度平衡并確定空白率（如果有）。加入 0.1 ml 稀釋酶并記錄 A 510的增加4-5 分鐘。從曲線的線性部分計(jì)算ΔA 510 /分鐘。

計(jì)算：

注：雖然用苯酚安替比林法得到的反應(yīng)速率比以的方法低 4.5-4.7 倍，但過氧化物酶制劑是相同的。

RZ (Reinheitzahl) 是吸光度比，A 403 /A 275 (RZ) 已被用作純度的指示。然而，香農(nóng)等人。(1966) 報(bào)告說，同工酶的這個(gè)比率從 2.50 變化到 4.19。這點(diǎn)，連同緩沖液和 pH 值的影響，似乎使這個(gè)比率作為純度標(biāo)準(zhǔn)的準(zhǔn)確性受到質(zhì)疑。

Worthington主要研究覆蓋生物技術(shù)和生命科學(xué)研究，診斷，生物制藥和生物加工應(yīng)用的高質(zhì)量純化酶，蛋白質(zhì)，核酸和試劑盒。艾美捷科技是Worthington的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。

來源：https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml