艾美捷 Worthington 神經(jīng)氨酸酶來源于產(chǎn)氣莢膜梭菌。在 Cassidy等人的工作的基礎(chǔ)上，該實驗室開發(fā)了色譜純化方法。（1965 年）。Wooley 和 Gommi (1966) 描述了這種神經(jīng)氨酸酶在測量血清素受體的方法中的用途。它還用于確定組織中結(jié)合的 N-乙酰神經(jīng)氨酸。

艾美捷Worthington產(chǎn)氣莢膜梭菌神經(jīng)氨酸酶的特征：

佳 pH 值：5.0-5.1 (Burton 1963)。在 pH 4.0 或高于 pH 8.0 時幾乎沒有活性或沒有活性。

等電點：5.1（Groome 和 Belyaven 1958）。

活化劑：無，與來自弧菌的神經(jīng)氨酸酶相反，后者需要二價金屬。

抑制劑：使用神經(jīng)氨酸酶抑制劑作為可能的抗病毒和抗菌劑已顯示出相當(dāng)大的興趣。（Khorlin等人1970；Haskell等人1970；和 Tute 1970）。

穩(wěn)定劑：血清白蛋白，0.3 mg/ml (Cassidy et al . 1965)。

穩(wěn)定性：純化后的制劑在 4°C 下至少可以穩(wěn)定保存兩年（Cassidy et al . 1965）。

艾美捷Worthington神經(jīng)氨酸酶的測定：

Method : 該測定基于牛頜下粘蛋白 (Worthington Code: MU) 釋放的唾液酸 (NANA) 的測量。在特定條件下，在 37°C 和 pH 5.0 條件下，個單位每分鐘會從牛頜下粘蛋白中釋放 1 微摩爾唾液酸。Ziegler和Hutchinson (1972)描述了用于確定神經(jīng)氨酸酶的偶聯(lián)酶測定。

試劑：

9 M 磷酸中的 0.2 M 偏高碘酸鈉

0.5 M 硫酸鈉

0.755 M 亞砷丨酸鈉溶于 0.5 M 硫酸鈉和 0.1 N H2SO4。通過將 25 gm 亞砷丨酸鈉（分子量 129.91）溶解在 250 ml 0.5 M 硫酸鈉中并加入 5 ml 5 N H2SO4 來制備。為了產(chǎn)生溶液，可能需要稍微加熱。

2.5 N 鹽酸

2.5 N HCl 中的 5% 磷鎢酸

0.6% 兩次結(jié)晶的硫代巴比妥酸在 0.5 M 硫酸鈉中。通過將 4.5 克 2x 結(jié)晶硫代巴比妥酸溶解在 750 ml 0.5 M 硫酸鈉中來制備。加熱以產(chǎn)生溶液并使其冷卻。將形成結(jié)晶沉淀。僅使用上清液進行檢測。

0.1 M 乙酸，pH 5.0

1% 粘蛋白，pH 5.0。通過將 100 mgs Worthington 頜下粘蛋白（代碼：MU）溶解在 9 ml 試劑水中進行制備，用乙酸將 pH 值調(diào)節(jié)至 5.0，并稀釋至終體積為 10 ml。溶液在 pH 5.0 時會顯得渾濁。

環(huán)己酮。注意：閱讀產(chǎn)品標簽以獲取處理說明。

酶：

將酶以 1 mg/ml 溶解在試劑水中。在使用立即準備四種稀釋液，范圍從 0.1 mg/ml 到 0.005 mg/ml。

程序：

準備個 37°C 的水浴。將分光光度計調(diào)整到 549 nm。進入編號管移液器如下：

粘蛋白 0.4 毫升

0.1 M 乙酸 0.5 毫升

每隔段時間，加入 0.1 ml 的相應(yīng)酶稀釋液。包括 0.1 ml 水的空白代替酶。在 37°C 水浴中孵育 30 分鐘。通過向每個試管中加入 1 ml 5% 磷鎢酸，定時停止反應(yīng)。離心 10 分鐘。取出每個上清液的 0.5 ml 等分試樣以干洗試管。向每個中加入 0.1 ml 0.2 M 偏高碘酸鈉。在室溫下靜置 20 分鐘，加入 1.0 ml 0.755 M 亞砷丨酸鈉。搖動試管直到棕色消失，然后加入 3.0 ml 0.6% 硫代巴比妥酸。在沸水浴中加熱 15 分鐘，在冰浴中冷卻 5 分鐘，然后在每管中加入 4.6 ml 環(huán)己酮。通過渦旋提取環(huán)己酮層中的顏色。高速離心15分鐘。549的有色環(huán)己酮層與試劑水空白。

注意：樣品的終 A 549不應(yīng)超過 0.5 個吸收單位。

Worthington主要研究覆蓋生物技術(shù)和生命科學(xué)研究，診斷，生物制藥和生物加工應(yīng)用的高質(zhì)量純化酶，蛋白質(zhì)，核酸和試劑盒。艾美捷科技是Worthington的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。

來源：https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml