單位定義：個(gè)單位在 25°C、pH 7.3 下每分鐘氧化 1 微摩爾 NADH

請(qǐng)注意，哺乳動(dòng)物乳酸脫氫酶 的來(lái)源已從天然兔肌肉形式變?yōu)樵诖竽c桿菌中表達(dá)的重組體。重組酶達(dá)到或超過(guò)先提供的天然酶的規(guī)格。

艾美捷Worthington牛心LDH的特點(diǎn)：

分子量：35,000/亞基（Fosmire 和 Timasheff 1972）。136,700 ± 2,100/四聚體 (Huston et al . 1972)。

組成：Vallee 和 Williams (1975) 報(bào)道了它在低 pH 條件下的亞基解離。另見(jiàn) Yang 和 Schwert (1972) 以及 Gold 和 Segal (1965)。

消光系數(shù)：消光系數(shù)=14.9。

活動(dòng)：參見(jiàn) Borgmann等人。（1974）。

特異性：該酶對(duì) L(+)乳酸具有特異性。Meister (1950) 報(bào)告說(shuō)它可以減少幾種 α-酮酸和 α,β-二酮酸，但減少丙酮酸的速度大約是十分之。

抑制劑：LDH 相當(dāng)穩(wěn)定。它被碘化物滅活。對(duì)汞苯甲酸鹽的抑制作用很慢。見(jiàn) Schwert 和 Winer (1963)；還有安德森等人。(1974) 和 Bloxham等人。（1975 年）。

活化劑：George等人報(bào)道了許多穩(wěn)定酶的有機(jī)化合物，例如二甲亞砜、乙醇和甲醇。（1969 年）。己烯雌酚及其幾種衍生物也可以穩(wěn)定酶（Cohen et al . 1969）。

來(lái)自兔肌肉的 LDH 的特征：

分子量：140,000。

組成：Lovell 和 Winzor (1974) 報(bào)告說(shuō)，四聚體在 pH 為 5 的醋酸鹽 - 氯化物緩沖液中完全解離成兩個(gè)二聚體（分子量 70,000）（對(duì)牛心 LDH 沒(méi)有影響的條件）。磷酸鹽和吡啶核苷酸穩(wěn)定四聚體的四元結(jié)構(gòu)。磷酸鹽具有活化作用。另見(jiàn) Cho 和 Swainsgood (1973)。

活性：Stambaugh 和 Post (1966) 以及 Zewe 和 Fromm (1965) 報(bào)告了反應(yīng)動(dòng)力學(xué)。

艾美捷Worthington乳酸脫氫酶的測(cè)定：

Method : 反應(yīng)速度由 NADH 氧化導(dǎo)致的 340 nm 處吸光度降低來(lái)確定。在指定條件下，在 25°C 和 pH 7.3 條件下，個(gè)單位每分鐘會(huì)氧化 1 微摩爾 NADH。

試劑:

0.2 M Tris⋅HCl，pH 7.3

6.6 mM NADH 在高于 0.2 M Tris⋅HCl 緩沖液，pH 7.3

30 mM 丙酮酸鈉在 0.2 以上 Tris⋅HCl 緩沖液中，pH 7.3

酶:

以 1 mg/ml 溶解在 0.2 M Tris⋅HCl 緩沖液中。使用稀釋酶以獲得 0.02-0.04 ΔA/min 的速率。在 Tris 緩沖液中并保持低溫。

Worthington哺乳動(dòng)物乳酸脫氫酶蛋白質(zhì)濃度的測(cè)定：

程序：

將分光光度計(jì)設(shè)置為 340 nm 和 25°C。

移液器如下：

Tris⋅HCl, 0.2 M pH 7.3 2.8 毫升

6.6 毫米 NADH 0.1 毫升

30 mM 丙酮酸鈉 0.1 毫升

在分光光度計(jì)中孵育 4-5 分鐘以達(dá)到溫度平衡并建立空白率（如果有）。

加入 0.1 ml 適當(dāng)稀釋的酶，并從初始線(xiàn)性部分記錄 ΔA 340 /min。

Worthington主要研究覆蓋生物技術(shù)和生命科學(xué)研究，診斷，生物制藥和生物加工應(yīng)用的高質(zhì)量純化酶，蛋白質(zhì)，核酸和試劑盒。艾美捷科技是Worthington的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。