艾美捷Worthington 提供兩種制劑：種來自常規(guī)的P. testosteroni(ATCC 11966) 培養(yǎng)產(chǎn)生 α 和 β 酶，另種來自幾乎完全產(chǎn)生 α 酶的突變菌株。通過使用兩者，可以通過差異確定β-羥基類固醇。

艾美捷Worthington羥基類固醇脫氫酶技術(shù)說明：STDHP 和 STDH 同時(shí)包含 α 和 β 活性。然而，STDHMP 僅包含 α 活性。 

單位定義：個(gè)單位在 25°C、pH 9.0 下每分鐘減少 1 微摩爾 NAD，使用雄酮或睪酮作為底物。

艾美捷Worthington羥基類固醇脫氫酶測定：

Method : 該測定是 Marcus 和 Talalay (1956) 的測定，其中反應(yīng)速度被測量為由于 NAD 的減少而在 340 nm 處吸光度的增加。個(gè)單位在 25°C 和 pH 9.0 條件下每分鐘減少 1 微摩爾 NAD，在特定條件下使用雄酮或睪酮作為底物。

試劑 :

0.03 M Tris⋅HCl 緩沖液，pH 7.2，含 0.001 M EDTA

0.166 M 焦磷酸鈉緩沖液，pH 9.0

0.0043 M NAD 在試劑水中。注意：NAD 的鹽形式和水合程度可能會(huì)有所不同。應(yīng)小心使用分析和正確的分子量。

0.015% 雄酮。通過將 15 mg 雄酮溶解在 100 ml 無水甲醇中來制備。

0.015% 睪酮。通過將 15 mg 睪酮溶解在 100 ml 無水甲醇中來制備。

酶 :

將純化的酶以 1 mg/ml 的濃度溶解在含有 0.001 M EDTA 的 0.03 M Tris⋅HCl pH 7.2 緩沖液中。還用這種緩沖液進(jìn)行進(jìn)步稀釋。

粗酶：從細(xì)胞中提取酶可以通過用 0.001 M EDTA 對 0.03 M Tris·HCl 緩沖液（pH 7.2）中的 50 mg/ml 細(xì)胞懸浮液進(jìn)行超聲處理來完成。通過離心澄清并測定上清液。

對于測定，稀釋酶以獲得 0.02-0.04 ΔA/min 的速率。

程序 :

將分光光度計(jì)調(diào)整到 340 nm 和 25°C。

將移液器移入每個(gè)比色皿，如下所示：

0.166 M焦磷酸鈉 0.6 毫升

0.0043 M NAD 0.2 毫升

試劑水 2.0毫升

酶 0.1 毫升

在分光光度計(jì)中孵育 3-4 分鐘以達(dá)到溫度平衡并建立空白率（如果有）。在零時(shí)，加入 0.01 ml 睪酮溶液。記錄 A 340 3-4 分鐘。從曲線的初始線性部分計(jì)算每分鐘 ΔA 340 。重復(fù)，使用雄酮作為底物。

Worthington主要研究覆蓋生物技術(shù)和生命科學(xué)研究，診斷，生物制藥和生物加工應(yīng)用的高質(zhì)量純化酶，蛋白質(zhì)，核酸和試劑盒。艾美捷科技是Worthington的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。