艾美捷Worthington半乳糖氧化酶特異性：

GAO 具有廣泛的底物特異性，但具有顯著的立體特異性，僅氧化底物的 D-異構(gòu)體 (McPherson et al . 1992)。GAO 將氧化游離和聚合形式的半乳糖和些半乳糖衍生物。氧化發(fā)生在 C6 位置。

艾美捷Worthington 半乳糖氧化酶化學(xué)性質(zhì)：

分子量：68.5 kDa（根據(jù)翻譯的 DNA 序列和 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳計(jì)算，McPherson et al. 1992）

68.0 ± 3.0 kDa（由物理測量確定，Cooper等人1959）

佳pH值：7.0（庫珀等人，1959 年）  

等電點(diǎn)：7.75（理論）

消光系數(shù)：

122,480 cm -1 M -1（理論值）

E 1%, 280 = 17.87 (理論)

抑制劑：

二乙基二硫代氨基甲酸酯

疊丨氮化物

羥胺

乙二胺四乙酸

應(yīng)用

血液和其他生物體液中半乳糖的定量測定（Frings 和 Pardue 1964、Hankin 1966 和 Roth等人1965）

組織化學(xué)定位半乳糖 (Roberts ａnd Gupta 1965)

檢測和區(qū)分糖蛋白 (Itaya et al . 1975)

艾美捷Worthington 半乳糖氧化酶測定：

Method : 在過氧化物酶/鄰聯(lián)甲苯胺偶聯(lián)系統(tǒng)中測量反應(yīng)速度，作為由半乳糖氧化引起的A 425的增加。在 25°C 和規(guī)定條件下的 pH 值 6.0 下，個(gè)單位導(dǎo)致 A 425的變化為每分鐘 1.0。

試劑：

0.1 M 磷酸鉀緩沖液，pH 6.0

0.5% 鄰甲苯胺。注意：據(jù)報(bào)道鄰甲苯胺具有致癌性。小心輕放。

過氧化物酶。將 Worthington 過氧化物酶（代碼：HPOD）以大約 60 u/ml 的濃度溶解在試劑水中。

10% 半乳糖。靜置過夜以達(dá)到突變平衡。

酶：

以 1 mg/ml 的濃度溶解在試劑水中。進(jìn)步稀釋至濃度為 0.2 - 0.5 單位/ml。

程序：

將分光光度計(jì)調(diào)整到 425 nm 和 25°C。

通過將 0.1 ml tolidine 添加到 12 ml 0.1 M 磷酸鉀緩沖液 pH 6.0 中來制備 tolidine-緩沖混合物。

將移液器移入每個(gè)比色皿，如下所示：

聯(lián)苯胺緩沖液 1.7 毫升

10% 半乳糖 1.5 毫升

過氧化物酶 0.1 毫升

在分光光度計(jì)中于 25°C 孵育 3-4 分鐘以達(dá)到溫度平衡并確定空白率（如果有）。加入 0.1 ml 適當(dāng)稀釋的酶并記錄 A 425 /min 的增加。從曲線的初始線性部分。

Worthington主要研究覆蓋生物技術(shù)和生命科學(xué)研究，診斷，生物制藥和生物加工應(yīng)用的高質(zhì)量純化酶，蛋白質(zhì)，核酸和試劑盒。艾美捷科技是Worthington的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。

來源：https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml