Columbia Biosciences艾美捷SureLight Glow 螢火蟲熒光素酶細(xì)胞活力測(cè)定試劑盒組分：

1.螢火蟲螢光素酶（凍干）

2.D-熒光素（凍干）

3.裂解緩沖液（冷凍）

Columbia Biosciences艾美捷螢火蟲螢光素酶細(xì)胞活力檢測(cè)試劑制備：

1.解凍緩沖液；平衡至室溫

2.用緩沖液重構(gòu)凍干酶/底物

3.通過渦旋或輕輕顛倒混合

Columbia Biosciences艾美捷螢火蟲螢光素酶細(xì)胞活力檢測(cè)方案：

1.在培養(yǎng)基中制備含有哺乳動(dòng)物細(xì)胞的不透明壁多孔板（例如，對(duì)于 96 孔板，每孔 100 µl）

2.制備含有無細(xì)胞培養(yǎng)基的對(duì)照孔

3.將測(cè)試化合物添加到實(shí)驗(yàn)孔中并根據(jù)細(xì)胞培養(yǎng)方案進(jìn)行孵育

4.在室溫下平衡板及其內(nèi)容物，大約 15-30 分鐘

5.在每個(gè)孔中添加與含有細(xì)胞的培養(yǎng)基體積相等的細(xì)胞活力試劑（例如，100ul 試劑加入 100ul 細(xì)胞培養(yǎng)基）

6.在軌道振蕩器上混合內(nèi)容物以誘導(dǎo)細(xì)胞裂解

7.讓板在室溫下孵育 5-15 分鐘以穩(wěn)定發(fā)光信號(hào)

8.在光度計(jì)上讀取結(jié)果

左：活細(xì)胞數(shù)量與發(fā)光信號(hào)的相關(guān)性。在 100 µl RPMI-1640/10% FBS 培養(yǎng)基中制備兩倍連續(xù)稀釋的 THP-1 細(xì)胞（每孔 50,000 至 49 個(gè)細(xì)胞）。向每個(gè)孔中加入 100 µl 試劑，反應(yīng)在室溫下孵育 15 分鐘。在發(fā)光計(jì)上測(cè)量發(fā)光信號(hào)并以相對(duì)光單位 (RLU) 表示。

右：發(fā)光信號(hào)隨時(shí)間的穩(wěn)定性。將等量 (100 µl) 的細(xì)胞活力試劑添加到 100 µl RPMI1640/10% FBS 培養(yǎng)基（活細(xì)胞）中的 50,000 個(gè) THP-1 細(xì)胞中或僅添加到培養(yǎng)基（對(duì)照；無細(xì)胞）中。在發(fā)光計(jì)上的指定時(shí)間段內(nèi)每 10 分鐘監(jiān)測(cè)次發(fā)光信號(hào)。

Columbia Biosciences相關(guān)研究：

SureLight® 銪胺反應(yīng)性標(biāo)記試劑盒  AD-EU-ITC-100

Cyclic AMP TR-FRET 試劑盒，1000 次測(cè)試  AD-cAMP-1K

Columbia Biosciences 致力于開發(fā)和生產(chǎn)熒光蛋白，標(biāo)記抗體和新型蛋白質(zhì)純化配體。長在于培養(yǎng)藻類、提取和純化染料以及將這些和其他熒光團(tuán)與抗體結(jié)合。艾美捷科技是Columbia Biosciences 的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。

來源：https://www.amyjet.com/brand/Columbia-Biosciences.shtml