使用熒光標記TrueBlot二抗則可避免這些情況，特異地檢測出免疫沉淀而得的抗原(如下圖）。

當(dāng)使用IP分離蛋白時，捕獲抗體與目標蛋白質(zhì)結(jié)合（Step 1），添加Protein A 或Protein G 包被的磁珠以固定抗體-目標蛋白質(zhì)復(fù)合物（Step 2）并洗掉不需要的材料（Step 3）。常規(guī)IP中的后步驟通常包括使用加熱和還原/變性劑使蛋白質(zhì)變性（Step 4）。

當(dāng)洗脫的IP樣品通過SDS-PAGE分離（Step 5），后續(xù)Western blot中使用的相同抗進行檢測，然后分別使用常規(guī)二抗和TrueBlot^TM二抗檢測時，結(jié)果表面：使用常規(guī)二抗檢測時，捕獲抗體的重鏈和輕鏈都可以檢測到（Step 5 右圖），這可能會掩蓋您感興趣的蛋白，特別是如果它的大小與IgG重鏈或輕鏈相近時，使用TrueBlot^TM二抗檢測時，只檢測到特異性的目的蛋白（Step 5 左圖）。

由結(jié)果可知：用傳統(tǒng)的HRP標記二抗檢測時會出現(xiàn)輕鏈和重鏈條帶，而用熒光標記TrueBlot^TM二抗檢測時則沒有，表明TrueBlot^TM二抗僅識別天然（非還原）狀態(tài)的抗，消除重鏈和輕鏈條帶的干擾，以為免疫沉淀樣品提供準確、出版質(zhì)量的WB結(jié)果。

熒光標記TrueBlot二抗特點：：

1、完全排除的免疫沉淀用抗重輕鏈的干擾，結(jié)果清晰、準確，特異性強；

2、使用簡單，僅將傳統(tǒng)的二抗替換成TrueBlot^TM系列二抗即可。

熒光標記TrueBlot二抗注意要點：

1、需對免疫沉淀物進行徹底還原；

2、免疫印跡時需用牛奶作為封閉液，而不能用BSA(牛血清白蛋白)，因為后者的封閉作用不強。

3、當(dāng)用Rabbit IgG TrueBlot^TM對免疫印跡膜進行檢測時，要先用anti-IgG微球來進行免疫沉淀步驟，而不能使用Protein A或Protein G微球，因為后者與Rabbit IgG有很強的親合力，會引起污染。

來源：https://www.amyjet.com/featured/Rockland-TrueBlot.shtml