1.SOS1 GTP交換活性抑制劑的研究

2.SOS1結(jié)合蛋白的鑒定

3.不同GTP酶對SOS1-GEF活性的研究

SOS1 Ras GEF蛋白材料：

人類SOS1交換域（564-1049）蛋白（SOS1 ExD）已在細菌表達系統(tǒng)中產(chǎn)生。重組蛋白的氨基末端含有個6組氨酸標(biāo)簽（His標(biāo)簽）。SOS1 ExD蛋白的分子量約為61 kDa。蛋白質(zhì)以凍干白色粉末的形式提供。

SOS1 Ras GEF 蛋白存儲：

應(yīng)通過添加33μl蒸餾水將蛋白質(zhì)重組至50µM（3.03 mg/ml）。蛋白質(zhì)將在以下緩沖液中：17 mM Tris pH 7.5、17 mM NaCl、0.2 mM MgCl2、2.3%蔗糖和0.3%右旋糖酐。為了保持蛋白質(zhì)的高生物活性，強烈建議將蛋白質(zhì)溶液分為“實驗大小”的等份，并在液氮中快速冷凍。該蛋白質(zhì)可在-70°C下儲存6個月。避免反復(fù)的凍融循環(huán)。凍干蛋白質(zhì)在4°C下干燥保存（濕度<10%）1年。

SOS1 Ras GEF 蛋白純度：

蛋白質(zhì)純度通過在4-20%聚丙烯酰胺梯度凝膠上掃描考馬斯藍染色蛋白質(zhì)的密度測定來確定。確定SOS1 ExD蛋白純度>90%。

SOS1 Ras GEF 蛋白試劑：

1.重組Ras蛋白

2.重組SOS1 ExD蛋白（Cat.#GE02）

3.2倍交換緩沖液（40 mM Tris pH 7.5，100 mM NaCl，20 mM MgCl2，0.1 mg/ml BSA，1.5μM mant GTP）

4.稀釋緩沖液（20 mM Tris pH 7.5，50 mM NaCl，10 mM MgCl2，0.1 mg/ml BSA）

SOS1 Ras GEF 蛋白方法：

1.用稀釋緩沖液將SOS1 ExD蛋白（Cat#GE02）稀釋至6μM（0.36 mg/ml）。

2.用稀釋緩沖液將Ras稀釋至50μM（1.1 mg/ml）。

3.將凍干的2x交換緩沖液溶解在5mL Milli-Q水中，并在室溫下保存。

4.設(shè)置平板讀取器進行動態(tài)熒光測量（激發(fā)波長為360 nm，發(fā)射波長為440 nm），每30讀取次，持續(xù)30分鐘。

5.加入以下成分，輕輕移液混合：

交換反應(yīng)混合物/96孔黑板

2倍交換緩沖液/50μl

dH2O/36μl

50μM Ras/4μl

6.在各自的孔中移取10μl 6μM SOS1 ExD蛋白質(zhì)或稀釋緩沖液，立即上下移取兩次，并開始讀取熒光。

7.旦讀數(shù)完成并保存了讀板器文件，就可以使用讀板器附帶的軟件將數(shù)據(jù)減少到Vmax來計算匯率。