293/Cas9細(xì)胞系穩(wěn)定表達(dá)Cas9和嘌呤霉素抗性基因。利用逆轉(zhuǎn)錄病毒將Cas9和嘌呤霉素抗性基因?qū)胗H代293細(xì)胞。

Cell Biolabs

Cell Biolabs：細(xì)胞學(xué)試劑品牌，為生物技術(shù)和研究類客戶提供基于細(xì)胞功能研究以及疾病等方面的技術(shù)和服務(wù)。主要涵蓋細(xì)胞研究、細(xì)胞信號通路和蛋白質(zhì)生物學(xué)、代謝研究、病原體和毒素、干細(xì)胞研究等域。

Cell Biolabs / 艾美捷 293/Cas9細(xì)胞系表達(dá)Cas9蛋白。293個細(xì)胞或293/Cas9細(xì)胞用酶裂解RIPA緩沖液，并使用Cell Biolab的Cas9 ELISA試劑盒（Cat#PRB-5079）檢測Cas9蛋白水平（見下圖）。

Cell Biolabs 293/Cas9細(xì)胞，通過形態(tài)學(xué)測定，臺盼藍(lán)染料排除，活細(xì)胞計數(shù)。293/Cas9細(xì)胞已經(jīng)過測試，沒有微生物污染。

1.培養(yǎng)基：DMEM（高糖），10%胎牛血清（FBS），0.1 mM MEM非必需氨基酸（NEAA），2 mM L-谷氨酰胺，1%Pen-Strep，（可選）1-2µg/mL嘌呤霉素。

2.冷凍培養(yǎng)基：70%DMEM、20%FBS、10%DMSO。

從冷凍細(xì)胞建立293/Cas9培養(yǎng)基

1.將10毫升完整的DMEM生長培養(yǎng)基置于50毫升錐形管中。解凍冰凍的食物在37°C水浴中輕輕攪拌，在1-2分鐘內(nèi)將細(xì)胞冷凍。凈化空氣用70%（v/v）乙醇擦拭冷凍瓶表面。

2.將解凍的細(xì)胞懸浮液轉(zhuǎn)移到含有10mL生長培養(yǎng)基的錐形管中。

3.在室溫下，以1000 rpm的轉(zhuǎn)速離心5分鐘，收集細(xì)胞。移除通過抽吸生長培養(yǎng)基。

4.通過輕輕移液，將細(xì)胞重新懸浮在錐形管中的15ml新鮮生長培養(yǎng)基中然后下來。

5.將15 mL細(xì)胞懸浮液轉(zhuǎn)移至T-75組織培養(yǎng)瓶中。將電池置于37°C的溫度下培養(yǎng)箱中的二氧化碳濃度為5%。

6.每天監(jiān)測細(xì)胞密度。細(xì)胞應(yīng)在培養(yǎng)物達(dá)到95%匯合時傳代。

Cell Biolabs 相關(guān)試劑盒研究方案：

1.CBA-100：細(xì)胞選擇™ 24孔細(xì)胞遷移試驗(yàn)（8µm，比色法）

2.CBA-106：細(xì)胞選擇™ 96孔細(xì)胞遷移分析（8µm，熒光法）

3.CBA-120：細(xì)胞選擇™ 24孔傷口愈合試驗(yàn)（顯微鏡）

4.CBA-125：半徑™ 24孔細(xì)胞遷移分析（顯微鏡）

5.CBA-126：半徑™ 96孔細(xì)胞遷移分析（顯微鏡）