探針法Candidatus Mycoplasma haemaarvum實時定量PCR試劑盒

Probe-quantitative Real-time PCR Kit for Candidatus Mycoplasma haemaarvum

貨號：Mqt-hpa-20      規(guī)格：20個反應(yīng)

貨號：Mqt-hpa-50      規(guī)格：50個反應(yīng)

貨號：Mqt-hpa-100     規(guī)格：100個反應(yīng)

儲存：-20度，避光保存，有效期年。避免反復(fù)凍融。

試劑盒特點：

1， 本試劑盒可以特異性檢測Candidatus Mycoplasma haemaarvum，不受犬類攜帶微生物的影響。

2， 本試劑盒靈敏度高，低檢出值接近1個基因組。

3， 本試劑盒使用的DNA聚合酶具有抗抑制能力強(qiáng)和熱穩(wěn)定性好的特點；采用熱啟動方式，可抑制非特異性擴(kuò)增，降低背景熒光。

4， 本試劑盒帶有陽性對照樣品（組分C），可用于檢驗試劑盒有效性。

5， 帶有dUTP和UDG酶，可降低殘留DNA的污染。

嗜血支原體可以感染很多哺乳動物，包括貓、犬、豬、牛、羊等，也包括人類。目已知寄生于犬血中的支原體有兩種：犬血支原體（Mycoplasma haemocanis，舊稱Haemobartonella canis)和Candidatus Mycoplasma haemaarvum。Candidatus Mycoplasma haemaarvum于2004年在只行脾切除手術(shù)后的犬中次被發(fā)現(xiàn)，隨后發(fā)現(xiàn)其在多個地區(qū)廣泛分布，陽性率在0-33.3%不等。Candidatus Mycoplasma haemaarvum與Candidatus Mycoplasma haemominutum較為相似，直徑為0.3微米，無成串相連現(xiàn)象，很少引起明顯的溶血，除非是做了脾切除手術(shù)或者發(fā)生了免疫抑制。

嗜血支原體無法在體外培養(yǎng)，因此難以開發(fā)蛋白類檢測方法。常用的檢測方法包括顯微鏡鏡檢法和PCR法。鏡檢法靈敏度低，實驗誤差大，無法區(qū)分支原體種類，易受血液中其他物質(zhì)以及人工涂片方法的干擾，且支原體易從紅細(xì)胞表面脫落，造成漏檢。而PCR法在靈敏度上則有明顯的優(yōu)勢，且可以區(qū)分支原體種類。定量PCR法與普通PCR法相比，不僅可以精確定量，而且操作更為方便，更少受環(huán)境污染的影響。

本試劑盒基于16S rRNA基因的保守區(qū)域，設(shè)計特異性引物和探針，可以準(zhǔn)確識別Candidatus Mycoplasma haemaarvum，不受犬類攜帶微生物的影響。對184個犬血樣品的檢測獲得7個陽性，其中2個為與犬血支原體共感染。

本試劑盒包含熱啟動DNA聚合酶、dNTP（以dUTP代替dTTP）、引物、探針、陽性對照品、ROX染料，和用以防止殘余DNA污染的UDG（Uracil- DNA Glycosylase，尿嘧啶-DNA-糖基酶），用戶只需準(zhǔn)備好DNA樣品即可使用。

本試劑盒采用的DNA聚合酶源自端嗜熱菌（Thermus thermophilus），經(jīng)改造后較普通的Taq酶具有更強(qiáng)的抗抑制能力和熱穩(wěn)定性。通過結(jié)合特異性單克隆抗體，在室溫下DNA聚合酶活性被抑制。在PCR循環(huán)的熱變性階段，抗體受熱被去除，此時DNA聚合酶活性恢復(fù)，因此獲得“熱啟動”功能。熱啟動可減少殘余DNA的污染，提高PCR擴(kuò)增效率、靈敏度和目的片段產(chǎn)量。

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