探針?lè)ㄈ诵椭гw實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒

Probe-quantitative Real-time PCR Kit for Mycoplasma Hominis

貨號(hào)：Mqt-hom-20      規(guī)格：20個(gè)反應(yīng)

貨號(hào)：Mqt-hom-50      規(guī)格：50個(gè)反應(yīng)

貨號(hào)：Mqt-hom-100     規(guī)格：100個(gè)反應(yīng)

儲(chǔ)存：-20度，避光保存，有效期年。避免反復(fù)凍融。

試劑盒特點(diǎn)：

1， 特異性檢測(cè)人型支原體，與其他生物基因組沒(méi)有交叉反應(yīng)。

2， 靈敏度高，低檢測(cè)限為每反應(yīng)7個(gè)拷貝。

3， 使用的DNA聚合酶具有抗抑制能力強(qiáng)和熱穩(wěn)定性好的特點(diǎn)；采用熱啟動(dòng)方式，可抑制非特異性擴(kuò)增，降低背景熒光。

4， 帶有陽(yáng)性對(duì)照樣品（組分C），可用于檢驗(yàn)試劑盒有效性。

5， 帶有UDG酶和dUTP，可降低殘留DNA的污染。

人型支原體（Mycoplasma Hominis）是種多形性革蘭氏陰性菌，可呈球形、絲狀和不規(guī)則形狀，小直徑約80至100納米，大直徑約0.5至1微米，平均直徑約0.2至0.3微米，是種人類常見(jiàn)的條件性支原體，可發(fā)現(xiàn)于人類和靈長(zhǎng)類動(dòng)物。人型支原體可作為共生菌生活在泌尿生殖道，在呼吸道也可發(fā)現(xiàn)其存在。它在宿主中營(yíng)寄生和腐生生活，能引起多種感染，如：盆腔炎癥，流產(chǎn)后發(fā)熱，產(chǎn)后發(fā)熱，免疫抑制人群的外生殖器感染，以及新生兒的腦膜炎、肺炎和膿腫等。人型支原體有三種能量產(chǎn)生途徑，包括糖酵解、精氨酸水解和核黃素代謝。

體外培養(yǎng)法是傳統(tǒng)的人型支原體檢測(cè)方法，但這個(gè)方法相對(duì)較慢，需2-5天時(shí)間，靈敏度較低，容易受到其他微生物的污染，有時(shí)需要繁瑣的顯微觀察。這些缺點(diǎn)往往造成嚴(yán)重的時(shí)間浪費(fèi)。而PCR法用于檢測(cè)人型支原體，則有更高的靈敏度和更好的特異性，不受其他微生物污染的影響，且檢測(cè)時(shí)間短，僅需幾個(gè)小時(shí)即可獲得結(jié)果。定量PCR法與常規(guī)PCR法相比，不僅可以精確定量，而且操作更為方便，更少受環(huán)境污染的影響。

本試劑盒選擇高度保守的膜蛋白移位酶基因作為靶點(diǎn)，可以特異性識(shí)別人型支原體，經(jīng)BLAST驗(yàn)證，與其他生物基因組沒(méi)有交叉反應(yīng)。檢測(cè)13種支原體和31種細(xì)菌，無(wú)特異性反應(yīng)。在153個(gè)泌尿生殖道樣品中，檢測(cè)出108個(gè)人型支原體陽(yáng)性，而培養(yǎng)法第次檢測(cè)出98個(gè)陽(yáng)性，用凍存樣本重復(fù)檢測(cè)后證實(shí)另10個(gè)也為陽(yáng)性，可見(jiàn)本試劑盒靈敏度高于培養(yǎng)法。以gap基因和16S rRNA基因?yàn)榘悬c(diǎn)的PCR方法，由于這兩個(gè)基因在靶點(diǎn)區(qū)域有些小的突變，導(dǎo)致些菌株不能識(shí)別或靈敏度降低，而本試劑盒的靶點(diǎn)區(qū)域，經(jīng)數(shù)十個(gè)菌株的測(cè)序證實(shí)不包含突變。

本試劑盒包含熱啟動(dòng)DNA聚合酶、dNTP（以dUTP代替dTTP）、引物、探針、陽(yáng)性對(duì)照品、ROX染料，和用以防止殘余DNA污染的UDG（Uracil- DNA Glycosylase，尿嘧啶-DNA-糖基酶），用戶只需準(zhǔn)備好DNA樣品即可使用。

本試劑盒采用的DNA聚合酶源自端嗜熱菌（Thermus thermophilus），經(jīng)改造后較普通的Taq酶具有更強(qiáng)的抗抑制能力和熱穩(wěn)定性。通過(guò)結(jié)合特異性單克隆抗體，在室溫下DNA聚合酶活性被抑制。在PCR循環(huán)的熱變性階段，抗體受熱被去除，此時(shí)DNA聚合酶活性恢復(fù)，因此獲得“熱啟動(dòng)”功能。熱啟動(dòng)可減少殘余DNA的污染，提高PCR擴(kuò)增效率、靈敏度和目的片段產(chǎn)量。

UDG和dUTP可以阻止次步驟殘余DNA的擴(kuò)增。dUTP可以確保擴(kuò)增后的DNA中均含有尿嘧啶。UDG可從單鏈或雙鏈DNA上去除尿嘧啶殘基，從而阻止含有尿嘧啶的DNA作為下幾輪PCR的模板。在PCR循環(huán)開(kāi)始的UDG孵育步驟，可以破壞帶有尿嘧啶的PCR產(chǎn)物。經(jīng)過(guò)該去除污染步驟后，UDG在正常的PCR循環(huán)過(guò)程中被高溫滅活，對(duì)PCR反應(yīng)沒(méi)有影響。

相關(guān)產(chǎn)品：

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