探針法結(jié)膜支原體實時定量PCR試劑盒

Probe-quantitative Real-time PCR Kit for Mycoplasma Conjunctivae

貨號：Mqt-con-20      規(guī)格：20個反應(yīng)

貨號：Mqt-con-50      規(guī)格：50個反應(yīng)

貨號：Mqt-con-100     規(guī)格：100個反應(yīng)

儲存：-20度，避光保存，有效期年。避免反復(fù)凍融。

試劑盒特點：

1， 可以特異性檢測結(jié)膜支原體，與其他生物無交叉反應(yīng)。

2， 靈敏度高，檢測限為反應(yīng)液中4個基因組。

3， 使用的DNA聚合酶具有抗抑制能力強(qiáng)和熱穩(wěn)定性好的特點；采用熱啟動方式，可抑制非特異性擴(kuò)增，降低背景熒光。

4， 帶有陽性對照樣品（組分C），可用于檢驗試劑盒有效性。

5， 帶有UDG酶和dUTP，可降低殘留DNA的污染。

結(jié)膜支原體（Mycoplasma Conjunctivae）是綿羊、山羊、羚羊等反芻動物的傳染性角膜結(jié)膜炎（IKC）的主要病原體，在全球廣泛分布于家養(yǎng)的反芻類動物中。IKC是種常見的傳染性眼病，稱為小反芻動物的紅眼病，可在家養(yǎng)和野生動物之間傳播，其特點是結(jié)膜和角膜的炎癥。在晚期階段，角膜變得不透明甚至穿孔，致盲的野生動物可能從懸崖墜落或死于饑餓。項研究表明，成年綿羊中結(jié)膜支原體抗體的陽性率為53％。支原體性IKC可以在不同物種之間傳播，傳播途徑可能是物理接觸或蒼蠅等媒介昆蟲。目在大多數(shù)國家尚不清楚結(jié)膜支原體的流行程度，這可能是由于缺乏檢測結(jié)膜支原體的技術(shù)。

結(jié)膜支原體感染的經(jīng)典診斷方法是體外培養(yǎng)和后續(xù)對支原體菌落的免疫學(xué)鑒定。但是這個方法非常繁瑣，需要較長的時間，且需要業(yè)化的技術(shù)。而使用PCR法檢測則具有高靈敏度和高特異性的特點，且檢測時間短，僅需幾個小時即可獲得結(jié)果。定量PCR法與普通PCR法相比，不僅可以精確定量，而且操作更為方便，更少受環(huán)境污染的影響。

本試劑盒選取了結(jié)膜支原體基因組內(nèi)的個膜蛋白基因進(jìn)行PCR鑒定，引物經(jīng)BLAST驗證為特異性靶向結(jié)膜支原體，與其他生物的基因組無交叉反應(yīng)。通過檢測親緣關(guān)系較近的支原體和寄生于羊的其他微生物，本試劑盒對結(jié)膜支原體具有特異性，未見假陽性結(jié)果。對來自182只山羊、綿羊或羚羊的拭子樣本進(jìn)行檢測，本試劑盒檢測靈敏度明顯優(yōu)于平行檢測的巢式PCR法。

本試劑盒包含熱啟動DNA聚合酶、dNTP（以dUTP代替dTTP）、引物、探針、陽性對照品、ROX染料，和用以防止殘余DNA污染的UDG（Uracil- DNA Glycosylase，尿嘧啶-DNA-糖基酶），用戶只需準(zhǔn)備好DNA樣品即可使用。

本試劑盒采用的DNA聚合酶源自端嗜熱菌（Thermus thermophilus），經(jīng)改造后較普通的Taq酶具有更強(qiáng)的抗抑制能力和熱穩(wěn)定性。通過結(jié)合特異性單克隆抗體，在室溫下DNA聚合酶活性被抑制。在PCR循環(huán)的熱變性階段，抗體受熱被去除，此時DNA聚合酶活性恢復(fù)，因此獲得“熱啟動”功能。熱啟動可減少殘余DNA的污染，提高PCR擴(kuò)增效率、靈敏度和目的片段產(chǎn)量。

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