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探針法支原體污染實時定量PCR試劑盒

點擊次數:13發(fā)布時間:2018/3/16 21:17:20

探針法支原體污染實時定量PCR試劑盒

更新日期:2025/5/14 12:24:59

所 在 地:中國大陸

產品型號:Myco-qt-20

品牌名稱:炎熙生物

簡單介紹:對柔膜菌綱(包括支原體、螺原體和無膽甾原體)有強的特異性,與柔膜菌綱以外的其他基因組無交叉反應?蓹z出歐洲藥典要求的所有支原體種類。靈敏度高,低可檢出反應液中2-86個基因組。適用于細胞治療產品和細胞培養(yǎng)物中的支原體污染檢測,也可用作支原體通用檢測。

優(yōu)質供應

詳細內容

探針法支原體污染實時定量PCR試劑盒

Probe-quantitative Real-time PCR Kit for Mycoplasma Contamination

 

貨號:Myco-qt-20     規(guī)格:20次反應

貨號:Myco-qt-50     規(guī)格:50次反應

貨號:Myco-qt-100    規(guī)格:100次反應

儲存:-20度,避光保存,有效期年。避免反復凍融。

 

試劑盒特點:

1, 對柔膜菌綱(包括支原體、螺原體和無膽甾原體)有強的特異性,與柔膜菌綱以外的其他基因組無交叉反應?蓹z出歐洲藥典要求的所有支原體種類。

2, 靈敏度高,低可檢出反應液中2-86個基因組。

3, 使用熱啟動DNA聚合酶,可抑制非特異性擴增,降低背景熒光。

4, 帶有陽性對照樣品(組分C),可用于檢驗試劑盒有效性。

5, 帶有UDG酶,可降低殘留污染。

 

支原體(Mycoplasma)是種直徑約為0.1-0.3 μm、無細胞壁的原核生物,屬于柔膜菌綱(Mollicutes),常被用作柔膜菌綱的統(tǒng)稱。支原體具有變形能力,可透過常見過濾膜(0.22-0.45 μm),因此常規(guī)的無菌過濾方法不能將其去除,靶向細胞壁的抗生素也對其無效。由于在光學顯微鏡下無法判斷,細胞培養(yǎng)中的支原體污染是個令人煩惱的問題。支原體種類繁多,目已知的污染細胞的支原體有20多種,般是由試劑和人工操作帶入,95%的污染事件是由常見的五種支原體引起;由原代細胞的原始組織帶入而形成的污染也有發(fā)生,污染的支原體種類分布較為廣泛。根據細胞類型、來源和培養(yǎng)方法的不同,文獻報道的細胞污染率在15-80%之間,大影響了下游實驗的進行,因此必須使用門的方法檢測這些污染。

傳統(tǒng)的培養(yǎng)法操作比較繁瑣,需要很長時間(長需要28天),受操作人員的實驗技能影響比較大,并且有些支原體種類不能體外培養(yǎng)。而PCR法可有效克服上述缺點。本試劑盒采用探針法對細胞污染進行PCR檢測,使用通用性探針和引物,可識別超過150種支原體。常見的污染類型,如:豬鼻支原體(Mycoplasma hyorhinis)、唾液支原體(Mycoplasma salivarium)、口腔支原體(Mycoplasma orale)、精氨酸支原體(Mycoplasma arginini)、萊氏無膽甾原體(Acholeplasma laidlawii)、發(fā)酵支原體(Mycoplasma fermentans)和肺炎支原體(Mycoplasma pneumoniae),均可以檢出。根據易感程度和與人類的密切程度,選取12種支原體進行驗證,靈敏度高可達到每反應2個基因組,大部分種類靈敏度分布在每反應2-12個基因組,低的是解脲脲原體,靈敏度為每反應86個基因組。本試劑盒適用于檢測歐洲藥典要求的所有支原體種類,大部分種類可以達到歐洲藥典要求的10 CFU/ml的靈敏度,考慮到支原體培養(yǎng)條件和菌株活性的差異,少數種類的支原體難以判斷是否符合這個要求。引物具有柔膜菌/支原體特異性,與真核生物無交叉反應,即使與親緣關系較近的革蘭氏陽性菌,如:丙酮丁醇梭菌(Clostridium acetobutylicum)、嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)和肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae),也無交叉反應。本試劑盒適用于細胞治療產品和細胞培養(yǎng)物中的支原體污染檢測,也可用作支原體通用檢測。

試劑盒包含熱啟動DNA聚合酶、dNTP(以dUTP代替dTTP)、引物、探針、陽性對照品。探針在5`-端以FAM修飾,3`-端以MGB修飾。DNA聚合酶源自端嗜熱菌(Thermus thermophilus),經改造后較普通的Taq酶具有更強的抗抑制能力和熱穩(wěn)定性。通過結合特異性單克隆抗體,在室溫下DNA聚合酶活性被抑制。在PCR循環(huán)的熱變性階段,抗體受熱被去除,此時DNA聚合酶活性恢復,因此獲得熱啟動功能。熱啟動可減少殘余DNA的污染,提高PCR擴增效率、靈敏度和目的片段產量。

 

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