企業(yè)檔案
- 會(huì)員類型：免費(fèi)會(huì)員
- 工商認(rèn)證： 【已認(rèn)證】
- 最后認(rèn)證時(shí)間：
- 法人：
- 注冊(cè)號(hào)：
- 企業(yè)類型：經(jīng)銷商
- 注冊(cè)資金：人民幣萬(wàn)
聯(lián)系我們
聯(lián)系人：周俠
熱門標(biāo)簽
技術(shù)文章
肉與肉制品 脂肪酸測(cè)定
點(diǎn)擊次數(shù)：931 發(fā)布時(shí)間：2009/8/8 8:04:29
中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)
肉與肉制品 脂肪酸測(cè)定
Meat ａnd meat products-Method for
determination of fatty acids
GB9695.2-88
本標(biāo)準(zhǔn)等同采用標(biāo)準(zhǔn)ISO 5508—1978《動(dòng)植物油脂——脂肪酸甲酯的氣相色譜分析》和標(biāo)準(zhǔn)ISO5509-1978《動(dòng)植物油脂脂肪酸甲酯的制備》。
1 主題內(nèi)容與適用范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了對(duì)按照GB 9596.1肉與肉制品游離脂肪含量的測(cè)定得到的脂類制備脂肪甲酯的方法以及脂肪酸甲酯混合物成分用氣相色譜進(jìn)行定性定量測(cè)定的方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于肉和肉制品中脂肪酸的測(cè)定。
本標(biāo)準(zhǔn)不適用于測(cè)定聚合的脂肪酸。
2 引用標(biāo)準(zhǔn)
GB 9695.1 肉與肉制品 游離脂肪含量的測(cè)定。
3 原理
按GB 9695.1從肉和肉制品中提取脂類，并在三氟化硼存在下，進(jìn)行甘油脂的皂化和游離脂肪酸的酯化，然后進(jìn)氣相色譜儀，用面積歸一化法測(cè)其組成。
4 試劑
所用水為蒸餾水或相當(dāng)純度的水。
4．1 氫氧化鈉（GB 629）甲醇（GB 683）溶液：0.5mol。
將2g氫氧化鈉溶于100mL含水不超過(guò)0.5%（m/m）的甲醇中。溶液放置一段時(shí)間后，可能產(chǎn)生少量碳酸鈉白色沉淀而失效。此時(shí)重新配制。
4．2 三氟化硼（進(jìn)口分裝）甲醇（GB 683）溶液：12%~15%（m/m）。
4．3 庚烷（進(jìn)口分裝）：色譜純。
4．4 石油醚（HG 3-1003）：重蒸餾的，沸程40~60℃。溴值小于1，無(wú)殘?jiān)；蛞淹椋ㄟM(jìn)口分裝）。
4．5 無(wú)水硫酸鈉（HG 3-123）。
4．6 氯化鈉（GB 1266）：飽和溶液。
4．7 氮?dú)猓焊稍铮兌炔恍∮?/span>99.99%。
4．8 氫氣：純度不小于99.9%，無(wú)有機(jī)雜質(zhì)。
4．9 空氣或氧氣：無(wú)有機(jī)雜質(zhì)。
4．10 參照標(biāo)準(zhǔn)物
與被測(cè)定的脂肪酸甲酯相同的脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的混合物。
注：①各種試劑和溶液在進(jìn)行色譜分析時(shí)不得產(chǎn)生干擾脂肪酸甲酯峰的信號(hào)。在其色譜分析中，特別是三氟化硼甲醇溶液，可能在色譜圖的20~22碳脂肪酸區(qū)域內(nèi)產(chǎn)生干擾峰。因此每批新試劑或溶劑都應(yīng)用制備純油酸甲酯，并進(jìn)行色譜分析。若有干擾峰出現(xiàn)，該試劑應(yīng)棄之。
②若不存在含有20多或更多碳原子脂肪酸，已烷可代替庚烷。
5 裝置和儀器
5．1 實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器
5．2 氣相色譜儀配備FID檢測(cè)器。
5．3 微處理機(jī)或積分儀。
6 試樣
按GB 9695.1的規(guī)定，得到的脂肪。
7 分析步驟
7．1 脂肪酸甲酯的制備
三氟化硼有毒，下列操作請(qǐng)?jiān)谕L(fēng)櫥里進(jìn)行，玻璃儀器用后，應(yīng)立即用水沖洗。
7．1．1 試樣稱取
稱取脂肪約350mg。根據(jù)稱取脂肪量的多少按下表選擇燒瓶及試劑。
| 脂肪量 | 燒瓶 | 氫氧化鈉甲醇溶液 | 三氟化硼甲醇溶液 | 庚烷 |
| mg | mL | |||
| 100~250 | 50 | 4 | 5 | 1~3 |
| 250~500 | 50 | 6 | 7 | 2~5 |
| 500~750 | 100 | 8 | 9 | 4~8 |
| 750~1000 | 100 | 10 | 12 | 7~10 |
7．1．2 皂化
將樣品置于燒杯中，加入適量氫氧化鈉甲醇溶液及助沸劑。然后將冷凝管固定于燒瓶上。
水浴上回流，至沒(méi)有脂肪滴下，通常需5~10min。用移液管從冷凝管上部加入適量的三氟化硼甲醇溶液于沸騰的溶液里。
注：在含兩個(gè)以上雙鍵的脂肪酸存在時(shí)，排掉甲醇溶液和燒瓶中的空氣，可向溶液中導(dǎo)入氨氣數(shù)分鐘，皂化時(shí)從冷凝管上部持續(xù)通入氮?dú)狻?/span>
7．1．3 甲酯化
7．1．3．1 接7.1.2繼續(xù)煮沸2min。
7．1．3．2 經(jīng)冷凝管上部加入適量的庚烷，繼續(xù)煮沸1min。
停止加熱，冷卻至室溫后，移去冷凝管。加入少量飽和氯化鈉溶液并輕搖燒瓶數(shù)次。
繼續(xù)加入飽和氯化鈉溶液至燒瓶頸部。
7．1．3．3 吸取上層庚烷溶液約1mL于試管中，加適量無(wú)水硫酸鈉脫水。
此溶液含脂肪酸甲酯約100mg/mL，可直接取一定量注入氣相色譜儀測(cè)定。
7．1．4 脂肪酸甲酯的貯存
7．1．4．1 制備樣品應(yīng)盡快分析。不能盡快分析時(shí)，脂肪酸甲酯的庚烷溶液短期可貯存于有惰性氣體的冰箱中，不適合較長(zhǎng)時(shí)間的貯存。
7．1．4．2 不含溶劑的干燥甲酯應(yīng)立即予以分析。不能分析時(shí)，應(yīng)用惰性氣體封存于冰箱內(nèi)保存24h；或裝在真空密封管里，在冰箱內(nèi)可保存更長(zhǎng)時(shí)間。
7．2 色譜條件
7．2．1 選擇色譜分離條件的原則（對(duì)硬脂酸甲酯）。（附錄A）
a.理論塔板數(shù)不少于2000；
b.分辨率不小于1.25；
c.出峰時(shí)間小時(shí)15min。
7．2．2 色譜性：柱長(zhǎng)1~3m，柱內(nèi)徑2~4mm。
7．2．3 填充劑
7．2．3．1 擔(dān)體：酸洗硅烷化的硅藻土或其他合適的惰性擔(dān)體，其粒度分布均勻，大約在80~100目間。
7．2．3．2 固定相：聚酯型的極性液體（如二甘醇聚丁二酸酯、丁二醇聚丁二酸酯、乙二酸聚乙二酸酯等）、氰基硅酮或其他在氣相色譜中作分離用的固定相。固定相占填充的5%~20%。
7．2．4 柱溫：170℃℃
7．2．5 進(jìn)樣口溫度：比柱溫高20~50℃。
7．2．6 檢則器溫度：比柱溫高20~50℃。
7．2．7 載氣流速：15~60mL/min。
7．2．8 進(jìn)樣量：0.4~0.5μL。
7．3 定性分析
面積歸一化法。
8 分析結(jié)果的計(jì)算
8．1 一般計(jì)算
成分i含量由下式計(jì)算：
………………………………1（）
式中：Ci——成分i的質(zhì)量百分比：%；
Ai——成分i的的峰面積；
——全部峰面積之和。
一般情況下，根據(jù)面積百分比計(jì)算的結(jié)果可以代表質(zhì)量百分比。對(duì)于某些要求定量度高的測(cè)定，見(jiàn)8.2。
8．2 校正因子計(jì)算法
脂肪酸定量度要求很高時(shí)，采用校正因子法，將面積百分比換算為質(zhì)量百分比。
8．2．1 校正因子
校正因子測(cè)定，是在與樣品測(cè)定相同的操作條件下進(jìn)行參照標(biāo)準(zhǔn)物的測(cè)定，由得到的色譜圖計(jì)算。校正因子Ki按下式計(jì)算：
…………………………（2）
式中：Ki——組分i的校正因子；
mi——參照標(biāo)準(zhǔn)混合物中成分i的質(zhì)量；
——參照標(biāo)準(zhǔn)混合物中各種成分的質(zhì)量總和；
Ai——參照標(biāo)準(zhǔn)混合物中成分i的峰面積；
——參照標(biāo)準(zhǔn)混合物中各種成分峰面積之和。
8．2．2 相對(duì)校正因子
相對(duì)校正因子Ki’由下式給出：
…………………………（3）
式中：Ki’——相對(duì)校正因子；
Kc16——軟脂酸甲酯的校正因子；
Ki——組分i的校正因子。
8．2．3 含量計(jì)算
樣品中成分i的含量按下式計(jì)算：
……………………（4）
式中：C’i——校正后成分i的質(zhì)量百分比，%；
A’i——校正后成分i的峰面積；
——校正后樣品中各種成分峰面積之和。
8．3 計(jì)算結(jié)果保留小數(shù)點(diǎn)后一位。
9 精密度
9．1 重復(fù)性
同一分析者用同一儀器在同一天對(duì)同一樣品含量超過(guò)5%所進(jìn)行的分析，相對(duì)誤差不應(yīng)超過(guò)3%，或絕對(duì)誤差不超過(guò)1%；對(duì)于含量少的成分的測(cè)定，其絕對(duì)誤差應(yīng)小于0.2%。
9．2 再現(xiàn)性
同一樣品，待測(cè)成分超過(guò)5%，在不同實(shí)驗(yàn)室里測(cè)定獲得的兩個(gè)值的相對(duì)誤差不應(yīng)超過(guò)10%，絕對(duì)誤差不能超過(guò)3%；對(duì)于含量少的成分的測(cè)定，其絕對(duì)誤差不應(yīng)超過(guò)0.5%。
附錄A
柱效能和分辨率的測(cè)定
（補(bǔ)充件）
以分析各占一半的硬脂酸甲酯和油酸甲酯的混合物為例。
合理選取進(jìn)樣量、柱溫及載氣流速，使硬脂酸甲酯色譜峰的極大值在溶劑峰出現(xiàn)后15min內(nèi)就出現(xiàn)且占滿刻度的3/4。
理論塔板數(shù)的計(jì)算：
…………………………（A1）
分辨率R的計(jì)算：
…………………………（A2）
式中：n——理論塔板數(shù)；
R——分辨率；
dR1——保留距離，mm，進(jìn)樣開(kāi)始到硬脂酸甲酯峰極大值間的距離；
w1——硬脂酸甲酯的峰寬，шm，為曲線拐點(diǎn)處的切線與基線交點(diǎn)間的距離；
w2——硬脂酸甲酯和油酸甲酯峰極大值之間的距離，mm。詳見(jiàn)下圖。
圖A1
附加說(shuō)明：
本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)商業(yè)部食品局提出。
本標(biāo)準(zhǔn)由中國(guó)肉類食品綜合研究中心歸口。
本標(biāo)準(zhǔn)由中國(guó)肉類食品綜合研究中心負(fù)責(zé)起草。
本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人魯紅軍、劉曉東。
原創(chuàng)作者：上海金凱德分析儀器有限公司
